病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒

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供应商 ：北京索莱宝科技有限公司

规格 ：50T

病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒
货号：D2410
规格：50T/100T
保存：室温（15℃-25℃）干燥条件下可保存12个月，更长时间的保存可置于2℃-8℃。
产品内容：

试剂盒组成	D2410-50	D2410-100
蛋白酶K	1ml	1ml×2
预洗液	50ml	50ml×2
结合液	25ml	50ml
漂洗液	15ml	15ml×2
RNase free ddH2O	15ml	15ml×2
RNase free吸附柱	50个	100个
RNase free收集管(2ml)	50个	100个

产品简介：
本试剂盒适合于从血清、细胞上清、淋巴液中提取病毒DNA/RNA，不适合于细胞等组织内病毒DNA/RNA的提取。使用本试剂盒提取的基因组DNA/RNA可用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、RT-PCR实验等。
操作步骤（仅供参考）：
使用前请先在漂洗液中加入一瓶新开启的无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签，盖好摇匀。所有离心步骤均在2-8℃条件下进行。

1. 取病毒上清液0.5ml，12000rpm离心5min，尽量吸尽上清使用，弃去沉淀（如无沉淀可省去此步）。
2. 向病毒上清中加入20ul 10mg/ml的蛋白酶K，充分混匀，65℃消化10min，期间可颠倒离心管混匀数次。
3. 吸附柱前处理：从包装中取出吸附柱，放入收集管中，加入700ul 预洗液，室温放置2分钟，2-8℃ 12000 rpm离心2min，弃废液，将吸附柱放入收集管中待用。
4. 向病毒上清中加入500ul结合液，充分混匀。再向管中加入400ul无水乙醇，充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀，不影响DNA/RNA的提取，可将溶液和絮状沉淀都加入处理好的吸附柱中，静置2min。（吸附柱的最大容积为750ul，可分两次加入。一次吸附完离心后再将余下的混合液体加入柱中静置离心。）
5. 12000rpm离心2min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
6. 向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
7. 向吸附柱中加入500ul漂洗液，12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
8. 12000rpm离心2min，将吸附柱置于室温或50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。

9、将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加50ul-100ul经65℃水浴预热的RNase free ddH2O，室温放置5min，12000rpm离心2min。即可得到高质量的病毒基因组DNA/RNA。
注意事项：

1. 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase污染。使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。提取RNA时最好在RNase free的环境中操作。
2. 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA/RNA提取量也下降。
3. 若结合液中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解。
4. 如果样品消化不彻底，后面的离心步骤中可能会出现堵柱子的情况，可适当延长离心时间。
5. 洗脱缓冲液的体积最好不少于50ul，体积过小会影响回收效率。
6. 提取产物应保存在-70℃，以防基因组降解。
7. RNA检测：得到的基因组RNA片段的大小与病毒的保存条件和种类等因素有关。由于病毒不含有核糖体RNA，所以常规电泳无法检测，只有后期实验才可检测到。D260值为1相当于大约40 μg/ml单链RNA。
8. DNA检测：得到的基因组 DNA 片段的大小与病毒的保存条件和种类等因素有关。D260值为 1.0 相当于大约 50 ug/ml 双链 DNA、40 ug/ml 单链 DNA。如果病毒含量过低，最后提取的基因组 DNA 电泳可能无法检测到，但 PCR 等其他实验还会有结果。

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