稳健细胞株构建

稳转株即稳定表达的细胞株，指基于某一细胞系构建的持续过表达或干扰某特定基因的细胞系。

稳转株构建原理
通过将外源DNA/shRNA克隆到带有某种抗性基因的载体上，重组载体被转染至宿主细胞并整合到其染色体中，并能随细胞分裂稳定传递下去，再用载体中所含抗性基因进行筛选。

稳转株构建方法
目前常用到的方法有脂质体转染和病毒转染，病毒有慢病毒（Lentivirus），腺相关病毒（Adeno-associated Virus，AAV），逆转录病毒（Retrovirus）。

病毒表达系统	慢病毒表达系统	AAV表达系统	逆转录病毒表达系统
病毒基因组	RNA病毒	双链DNA病毒	RNA病毒
是否整合	病毒基因组整合于宿主基因组，长时间稳定表达外源基因	病毒基因组游离于宿主基因组外，瞬时表达外源基因	病毒基因组整合于宿主基因组，长时间稳定表达外源基因
感染细胞类型	分裂和不分裂的细胞，原代细胞，也可用于体内实验	分裂和不分裂的细胞	感染分裂细胞，但在干细胞中表达效率低
表达水平	高水平表达	高水平表达	高水平表达
表达时间	慢	快	快
免疫原性	低免疫原性	高免疫原性	低免疫原性
滴度	滴度高达108TU/ml	滴度高达1012TU/ml	滴度高达108TU/ml

构建步骤

 


服务流程