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文献和实验
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库存 :100
英文名 :Diagnostic Kit for Escherichia coli DNA(PCR Fluorescence Probing)
CAS号 :无
保质期 :1年
供应商 :优利科(上海)生命科学有限公司
保存条件 :-20℃
规格 :50T
大肠杆菌通用型(EC-U)核酸扩增检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
【产品名称】
通用名称:大肠杆菌通用型 (EC-U)核酸扩增检测试剂盒(PCR 荧光探针法)Name :Diagnostic Kit for Escherichia coli DNA(PCR Fluorescence Probing)
【包装规格】50T/盒
【预期用途】
本试剂盒适用于检测水样粪便,疑似污染的水、食物等样本中的大肠杆菌通用型,用于大肠杆菌通用型感染的辅助诊断,其检测结果仅供参考。【检验原理】
本试剂盒用一对大肠杆菌通用型特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光PCR 技术对大肠杆菌通用型的核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。【试剂组成】
名 称 | 规 格 |
酶液 | 50μl×1 管 |
EC-U 反应液 | 1.0ml×1 管 |
EC-U 阳性质控品 | 50μl ×1 管 |
阴性质控品 | 250μl ×1 管 |
【储存条件和有效期】
试剂盒保存于-20±5℃,有效期 12 个月;避免反复冻融,冻融次数不超过 5 次;试剂开瓶后,在室温条件下放置时间不
应超过 8 小时;运输采用干冰(或者冰袋)保持低温,运输时间不应超过 4 天。试剂盒生产日期见产品标签。
【适用仪器】
ABI 7300、7500、ABI stepone / stepone plus 、安捷伦 MX3000P/3005P、MJ Opticon2 等其他荧光定量 PCR 检测仪。【标本要求】
标本采集:水样便取 0.5~1mL;疑似污染的食物取 1g保存运输:上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过 6 个月,标本运送应采用 2~8℃冰袋运输,严禁反复冻融。
【使用方法】
- 样品处理(样本处理区)
- 样本前处理
-
- DNA 提取
- 对上述处理好的标本加入等体积核酸提取液(固体标本加入50uL 核酸提取液), 100℃恒温处理 10 分钟,13,000 rpm 离心5 分钟,取上清液转移至新的 1.5ml EP 管,-20℃保存;
- DNA 的提取也可以采用优利科(上海)生命科学有限公司生产的 DNA 提取试剂盒
- DNA 提取
- 试剂配制(试剂准备区)
试剂 | EC-U 反应液 | 酶液 |
用量(样本数为 N) | 20μl | 1μl |
- 加样(样本处理区)
- PCR 扩增(核酸扩增区)
-
- 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内;
- 设置好通道、样品信息,反应体系设置为 25ul;
-
- 推荐循环参数设置:
步骤 | 循环数 | 温度 | 时间 | 收集荧光信号 |
1 | 1 cycle | 95℃ | 10min | 否 |
2 | 40 cycle | 94℃ | 15sec | 否 |
55℃ | 30sec | 是 |
- 结果分析判定
- 结果分析条件设定
-
- 结果判断
可疑:检测通道 35.0<Ct 值≤37,建议重复检测,如果检测通道仍为 35.0<Ct 值≤37,且曲线有明显的增长曲线,判定为阳性,否则为阴性;
阴性:样本检测结果 Ct 值>37 或无 Ct 值。
- 检测方法的局限性
- 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关;
- 样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;
- 阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;
- 病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;
- 不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;
- 试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果;
- 本检测结果仅供参考,如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
- 质控标准
阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且 Ct 值≤32; 以上条件应同时满足,否则实验视为无效。
- 产品性能指标
最低检测限:2.0×102copies/ml。
精密度:批内、批间精密度检测 Ct 值的变异系数(CV)均≤3%。
【注意事项】
- 所有操作严格按照说明书进行;
- 试剂盒内各种组分使用前应自然融化,完全混匀并短暂离心;
- 反应液应避光保存;
- 反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;
- 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;
- 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;
- 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;
- 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全 通则》进行处理。
优利科(上海)生命科学有限公司
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