单纯疱疹病毒(HSV)核酸检测试剂盒(荧光 PCR 法)

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单纯疱疹病毒(HSV)核酸检测试剂盒(荧光 PCR 法)

品牌:YLKBIO

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英文名 :Diagnostic Kit for Herpes Smplex Virus DNA (Real-Time PCR Method)

CAS号 :

保质期 :1年

供应商 :优利科(上海)生命科学有限公司

保存条件 :-20℃

规格 :50T

单纯疱疹病毒(HSV)核酸检测试剂盒(荧光 PCR 法)
 
通用名称:单纯疱疹病毒 (HSV)核酸检测试剂盒(荧光 PCR 法)
Name     :Diagnostic Kit for Herpes Smplex Virus DNA (Real-Time PCR Method)
【包装规格】50T/盒

【预期用途】

本试剂盒适用于检测咽拭子标本等样本中的单纯疱疹病毒,用于单纯疱疹病毒感染的辅助诊断,其检测结果仅供参考。

【检验原理】

本试剂盒用一对单纯疱疹病毒特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光 PCR 技术对单纯疱疹病毒的核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。


【试剂组成】

包装规格 50T/盒
HSV 反应液 500μL×2 管
酶液 50μL×1 管
HSV 阳性质控品(4×106copies/mL) 50μL ×1 管
阴性质控品 250μL ×1 管
说明:不同批号的试剂盒组分不可交互使用。

【储存条件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次,有效期 12 个月。

【适用仪器】

ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、MJ Opticon2、LightCycler480、Bio-Rad、eppendorf 等系列荧光定量 PCR
检测仪。

【标本采集】

采集病人的咽拭子标本,应使用专用采样拭子,适度拭抹咽后壁和两侧扁桃体部位,应避免触及舌部;迅速将拭子放入标本采集管中,旋紧管盖并密封,以防干燥。

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过 6 个月,标本运送应采用 2~8℃冰袋运输,严禁反复冻融。

【使用方法】

  1. 样品处理(样本处理区)
    1. 样本前处理
取 100uL 棉拭子标本于 1.5mL 灭菌离心管中
    1. 核酸提取
推荐采用优利科(上海)生命科学有限公司生产的核酸提取或纯化试剂(磁珠法或离心柱法)进行核酸提取, 请按照试剂说明书进行操作。
  1. 试剂配制(试剂准备区)
根据待检测样本总数,设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照;反应管数每满 10 份,多配制 1 份),每测试反应体系配制如下表:
试剂 HSV 反应液 酶液
用量(样本数为 N) 20μL 1μL
  1. 加样(样本处理区)
将步骤 1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL,分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀, 短暂离心。
  1. PCR 扩增(核酸扩增区)
    1. 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内;
    2. 设置好通道、样品信息,反应体系设置为 25μL;
荧光通道选择: 检测通道(Reporter Dye)FAM, 淬灭通道(Quencher Dye)NONE,请勿选择 ROX 参比荧光。
    1. 推荐循环参数设置:
步骤 循环数 温度 时间 收集荧光信号
1 1 cycle 95℃ 10min
2 40 cycles 94℃ 15sec
55℃ 30sec



  1. 结果分析判定
    1. 结果分析条件设定
设置Baseline 和 Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲线出现整体倾斜时,根据分析后图像调节 Baseline 的start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节),以及Threshold 的Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。
    1. 结果判断
阳性:检测通道 Ct 值≤35,且曲线有明显的指数增长曲线;
可疑:检测通道 35<Ct 值≤38,建议重复检测,如果检测通道仍为 35<Ct 值≤38,且曲线有明显的增长曲线, 判定为阳性,否则为阴性;
阴性:样本检测结果 Ct 值>38 或无 Ct 值。
  1. 质控标准
阴性质控品:Ct>38 或无 Ct 值显示;
阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且 Ct 值≤32; 以上条件应同时满足,否则实验视为无效。
  1. 检测方法的局限性
  1. 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关;
  2. 样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;
  3. 阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;
  4. 病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;
  5. 不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;
  6. 试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果;
  7. 本检测结果仅供参考,如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。

【注意事项】

  1. 所有操作严格按照说明书进行;
  2. 试剂盒内各种组分使用前应自然融化,完全混匀并短暂离心;
  3. 反应液应避光保存;
  4. 反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;
  5. 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;
  6. 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;
  7. 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;
  8. 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。


优利科(上海)生命科学有限公司

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