汉坦病毒 2 型（HTV-2）核酸检测试剂盒（荧光 PCR 法）

价格： ￥2750

品牌：YLKBIO

货号：YLK-PCR0345

产品详情

【预期用途】

本试剂盒适用于检测病患血液、尿液及病变组织中的汉坦病毒 2 型 RNA，适用于汉坦病毒 2 型感染的辅助诊断。

【检验原理】

本试剂盒对汉坦病毒 2 型基因组保守区设计特异性的引物和探针，用一步法荧光 RT-PCR 技术对汉坦病毒 2
型 RNA 进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

【试剂组成】

包装规格	50T/盒
HTV-2 反应液	500μL×2 管
酶液	50μL×1 管
HTV-2 阳性质控品	50μL ×1 管
阴性质控品	250μL ×1 管

注：

不同批号试剂不能混用。
试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。

【储存条件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 12 个月。

【适用仪器】

ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

【标本采集】

抽取全血 5mL 至 EDTA-2Na 抗凝管，或采集患者尿液、病变组织。

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。

【使用方法】

样品处理（样本处理区）
1. 样本前处理

血液：直接取 100μL 于灭菌离心管中或取血清 100ul 于灭菌离心管中尿液：取 100μL 于灭菌离心管中；
组织样品：称取组织样品约 0.5g，置于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，匀浆后取 100μL
于 1.5mL 灭菌离心管中；

1. 核酸提取

推荐采用优利科（上海）生命科学有限公司生产的核酸提取或纯化试剂（磁珠法或离心柱法）进行核酸提取，请按照试剂说明书进行操作。

试剂配制（试剂准备区）

根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；反应管数每满 10 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：

试剂	HTV-2 反应液	酶液
用量	20μL	1μL

将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中，21uL/管。

加样（样本处理区）

将步骤 1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。

PCR 扩增（核酸扩增区）
1. 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；
2. 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL；荧光通道选择：

检测通道（Reporter Dye）FAM，淬灭通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光，选择 None 即可。

1. 推荐循环参数设置：

步骤	循环数	温度	时间	收集荧光信号
1	1 cycle	42℃	20min	否
2	1 cycle	95℃	10min	否
3	40 cycles	94℃	15sec	否
3	40 cycles	55℃	30sec	是

结果分析判定
1. 结果分析条件设定

设置Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。