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库存 :100
英文名 :Rickettsia prowazeki Detection Kit (Real-Time PCR Method)
CAS号 :无
保质期 :1年
供应商 :优利科(上海)生命科学有限公司
保存条件 :-20℃
规格 :50T
普氏立克次体(RP)核酸检测试剂盒(荧光 PCR 法)
通用名称:普氏立克次体(RP)核酸检测试剂盒(荧光 PCR 法)
Name :Rickettsia prowazeki Detection Kit (Real-Time PCR Method)
【包装规格】25T/盒、50T/盒
本试剂盒利用实时荧光定量 PCR 原理,定性检测普氏立克次体,对普氏立克次体的诊断及疗效评估有重要指导意义。
说明:不同批号的试剂盒组分不可交互使用。
将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中,21μL/管。
Name :Rickettsia prowazeki Detection Kit (Real-Time PCR Method)
【包装规格】25T/盒、50T/盒
【预期用途】
斑疹伤寒是由普氏立克次体(R .prowazekii)或莫氏立克次体(R.mooseri)引起的急性感染性疾病,普氏立克次体引起的感染称为流行性斑疹伤寒,而莫氏立克次体引起的称为地方性斑疹伤寒[1]。流行性斑疹伤寒为虱传播,临床症状较重,主要表现为高热、头痛、皮疹,甚至神经性症状显著,可出现听觉障碍、神志迷糊直至死亡。目前, 普氏立克次体的临床诊断主要依靠血清学检测,但是由于特异性抗体出现较晚,故无法在早期对该病进行诊断。培养分离方法操作复杂和耗时,而且成功率不高。普通 PCR 法显得不敏感,加上 PCR 法的其它缺陷,使得普氏立克次体的PCR 检测难以在临床上推广使用。实时荧光定量 PCR 是一种快速检测病原体的高特异和高敏感技术[2]。本试剂盒利用实时荧光定量 PCR 原理,定性检测普氏立克次体,对普氏立克次体的诊断及疗效评估有重要指导意义。
【检验原理】
本试剂盒采用 TaqMan 探针法实时荧光 PCR 技术,针对普氏立克次体基因高度保守区设计一对特异性引物和探针,利用相应仪器对 PCR 过程进行实时监测,实现检测结果的定性分析,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。【试剂组成】
包装规格 | 25T/盒 | 50T/盒 |
RP 反应液 | 500μL×1 管 | 500μL×2 管 |
酶液 | 25μL×1 管 | 50μL×1 管 |
RP 阳性质控品 | 50μL ×1 管 | 50μL ×1 管 |
阴性质控品 | 250μL ×1 管 | 250μL ×1 管 |
【储存条件及有效期】
-20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次,有效期 12 个月。【适用仪器】
ABI 、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量PCR 检测仪。【标本采集】
适用于人体的血液、体液和棉拭子等多种样本。【保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过 6 个月,标本运送应采用 2~8℃冰袋运输, 严禁反复冻融。【使用方法】
- 样品处理(样本处理区)
- 样本前处理
-
- 核酸提取
- 试剂配制(试剂准备区)
试剂 | RP 反应液 | 酶液 |
用量(样本数为N) | 20μL | 1μL |
- 加样(样本处理区)
- PCR 扩增(核酸扩增区)
- 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内;
- 设置好通道、样品信息,反应体系设置为 25μL;
ROX 参比荧光,选择None 即可。
-
- 推荐循环参数设置:
步骤 | 循环数 | 温度 | 时间 | 收集荧光信号 |
1 | 1 cycle | 95℃ | 10min | 否 |
2 | 40 cycles | 94℃ | 15sec | 否 |
55℃ | 30sec | 是 |
- 结果分析判定
- 结果分析条件设定
-
- 结果判断
可疑:检测通道 35<Ct 值≤38,建议重复检测,如果检测通道仍为 35<Ct 值≤38,且曲线有明显的增长曲线, 判定为阳性,否则为阴性;
阴性:样本检测结果 Ct 值>38 或无 Ct 值。
- 质控标准
阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且 Ct 值≤32; 以上条件应同时满足,否则实验视为无效。
- 检测方法的局限性
- 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关;
- 样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;
- 阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;
- 病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;
- 不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;
- 试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果;
- 本检测结果仅供参考,如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
【注意事项】
- 所有操作严格按照说明书进行;
- 试剂盒内各种组分使用前应自然融化,完全混匀并短暂离心;
- 反应液应避光保存;
- 反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;
- 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;
- 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;
- 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;
- 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
【参考文献】
- 俞树荣,陈香蕊。立克次体与立克次体病。第一版。北京:军事医学科学出版社,1999.24-31
- Pusterla N , Huder JB, Leutenegger CM , et al. Quantitative real- time PCR for detection of members of the Ehrlichia phago-cytophila genogroup in host animals and ixodes ricinus ticks〔J〕. J Clin Microbiol , 1999, 37: 1329- 1331.
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