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英文名：YLK-PCR0313

CAS号：无

保质期：1年

供应商：优利科（上海）生命科学有限公司

保存条件：-20℃

规格：50T

伪狂犬病毒通用型（PRV-gB）核酸检测试剂盒（荧光 PCR 法）

通用名称：伪狂犬病毒通用型（PRV-gB）核酸检测试剂盒（荧光 PCR 法）
Name ：Pseudorabies Virus gB gene Detection Kit (Real-Time PCR Method)
【包装规格】25T/盒、50T/盒

【预期用途】

伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)又称猪疱疹病毒Ⅰ型、传染性延髓麻痹病毒、奇痒症病毒、奥叶兹基氏病病毒。是引起牛、羊、猪、犬和猫等多种家畜和野生动物发热、奇痒(猪除外)及脑脊髓炎为主要症状的疱疹病毒[1]。猪是伪狂犬病的唯一自然宿主，对其危害大。可致妊♘母猪流产，产死胎及胎儿干尸化。对初生仔猪则引起神经症状，出现运动失调，麻痹，衰竭死亡，病死率 100%。成年猪多呈隐性感染，但可引起呼吸道症状[2]。病猪、带毒猪及带毒鼠类是本病的主要传染源，病毒主要从病猪的鼻分泌物、唾液、乳汁和尿中排除，有的带毒猪可持续排毒一年。
本试剂盒利用实时荧光 PCR 原理，检测伪狂犬病毒，对伪狂犬病毒引起的疾病及其并发症的诊断及疗效评估有重要指导意义。

【检验原理】

本试剂盒采用 TaqMan 探针法实时荧光 PCR 技术，设计一对伪狂犬病病毒通用型特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光 PCR 技术对伪狂犬病病毒通用型的 DNA 进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

【试剂组成】

名称	25T/盒	50T/盒
PRV-gB 反应液	500μL×1 管	500μL×2 管
酶液	25μL×1 管	50μL×1 管
PRV-gB 阳性质控品	50μL ×1 管	50μL ×1 管
阴性质控品	250μL ×1 管	250μL ×1 管

说明：不同批号的试剂盒组分不可交互使用。

【储存条件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 12 个月。

【适用仪器】

ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

【标本采集】

病死或扑杀的猪，取脑、淋巴结、脾脏、肺脏等组织；待检活猪，用棉拭子取鼻腔分泌物、唾液、乳汁等，置于 50%甘油生理盐水中，或用注射器取血 5mL。

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。

【使用方法】

样品处理（样本处理区）
1. 样本前处理

组织样品：每份组织分别从 3 个不同的位置称取样品约 1g，手术剪剪碎混匀后取 0. 5g 于研磨器中研磨，加入1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中，8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；分泌物棉拭子直接取 100μL 提取；血液取血清 100μL 提取。

1. 核酸提取

推荐采用优利科（上海）生命科学有限公司生产的核酸提取或纯化试剂（磁珠法或离心柱法）进行核酸提取，请按照试剂说明书进行操作。

试剂配制（试剂准备区）

根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；反应管数每满 10 份，多配制 1 份)，单个测试反应液体系配制如下表：

试剂	PRV-gB 反应液	酶液
用量（样本数为 N）	20μL	1μL

将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中，21μL/管。

加样（样本处理区）

将步骤 1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。

PCR 扩增（核酸扩增区）
1. 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；
2. 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL；

荧光通道选择：检测通道（Reporter Dye）FAM，淬灭通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列仪器请勿选择
ROX 参比荧光，选择 None 即可。

1. 推荐循环参数设置：

步骤	循环数	温度	时间	收集荧光信号
1	1 cycle	95℃	10min	否
2	40 cycles	94℃	15sec	否
2	40 cycles	55℃	30sec	是

结果分析判定
1. 结果分析条件设定

设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。