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文献和实验
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细胞类型 :细胞系
供应商 :智立中特(武汉)生物科技有限公司
库存 :100
英文名 :Mcf-7/adr
生长状态 :贴壁生长
运输方式 :顺丰派送
器官来源 :人
细胞形态 :上皮细胞样
物种来源 :人
组织来源 :乳腺癌
规格 :1×10⁶cells/T25培养瓶
细胞特性
1)来源:乳腺癌
2)形态:上皮细胞样贴壁生长
3)含量:>1x10e6个/mL
4)污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
运输和保存:使用含有优质胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞后,可在1000RPM,常温条件下,离心5min后,于洁净操作台弃去上清,加入推荐使用的培养基后转移至10cm培养皿或者T25培养瓶中培养,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途:仅供科研使用。
细胞培养步骤
一.培养基及培养冻存条件准备:
注意:培养瓶里面的培养液是不含药物的,待细胞长到70-80%汇合度时,去掉培养液,加含500ng/ml阿霉素药物的培养液,放入培养箱,这段时间会有少部分细胞悬浮起来,属于正常情况,通过换液可以去掉,等细胞长满就可以消化传代了,这时可以一直用含药物培养基来培养细胞,两代之后就可以将药物浓度提高到1000ng/ml,细胞冻存时不要在培养基中加药物。
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;北美胎牛血清(UnitedStates,GIBCO,货号16000-044),10%,添加2mML-GLU,添加1uMAdr。
2)培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%完全培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。
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