【产品名称】

商品名称：牛病毒性腹泻病毒(BVDV)核酸检测试剂盒(荧光-PCR 法)
Name ：Bovine Viral Diarrhea Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)
【包装规格】50T/盒

【预期用途】

牛病毒性腹泻是由牛病毒性腹泻病毒（BVDV）引起的一种传染病，可引起许多临床症状和一些疾病，包括繁殖障碍、呼吸综合征、先天性缺陷、肠炎、持续感染
（PI）和黏膜病（MD）等，易感动物除牛以外，还包括骆驼、绵羊、山羊、猪、鹿及多种野生反刍动物[1]。病牛的分泌物、排泄物、血液和脾脏等都含有病毒，以直接接触或间接接触方式传播[2-3]。
本试剂盒适用于检测的牛的肠粘膜、肠系膜淋巴结组织、排泄物等标本中牛病毒性腹泻病毒 RNA，适用于牛病毒性腹泻病毒感染的辅助诊断。

【检验原理】

本试剂盒根据牛病毒性腹泻病毒基因设计特异性引物和荧光探针，用一步法荧光RT-PCR 技术对牛病毒性腹泻病毒 RNA 进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

【试剂组成】

名称	规格
酶液	50μL×1 管
BVDV 反应液	500μL×2 管
BVDV 阳性质控品	50μL×1 管
阴性质控品	250μL×1 管

注：

不同批号试剂不能混用。
试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。

【储存条件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 12 个月。

【适用仪器】

ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

【标本采集】

病死或扑杀牛，取肠粘膜、肠系膜淋巴结组织；待检活牛，取排泄物，放入 1mL50%
甘油生理盐水中。

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。

【使用方法】

样品处理（样本处理区）
1. 样本前处理

每份组织分别从 3 个不同的位置称取样品约 1g，手术剪剪碎混匀后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中， 8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；排泄物：取 0.5g 于 1.5mL 灭菌离心管中，加入 1mL 生理盐水涡旋振荡，8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中。

1. RNA 提取

推荐采用优利科（上海）生命科学有限公司生产的 RNA 提取试剂盒（离心柱提取法），请按照试剂盒说明书进行操作。

试剂配制（试剂准备区）

根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满 7 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：

试剂	BVDV 反应液	酶液
用量	20μL	1μL

将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中，21uL/管。

加样（样本处理区）

将步骤 1 提取的 RNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。

PCR 扩增（核酸扩增区）
1. 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；

1. 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL；荧光通道选择：

检测通道（Reporter Dye）FAM，淬灭通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光，选择 None 即可。

1. 推荐循环参数设置：

步骤	循环数	温度	时间	收集荧光信号
1	1 cycle	42℃	20min	否
2	1 cycle	95℃	10min	否
3	40 cycles	94℃	15sec	否
3	40 cycles	55℃	30sec	是

结果分析判定
1. 结果分析条件设定

设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。