艰难梭状芽孢杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒价格

库存：100

英文名：Clostridium Difficile Probe PCR Kit

CAS号：无

保质期：1年

供应商：优利科（上海）生命科学有限公司

保存条件：-20℃

规格：50T

产品及特点

艰难梭状芽孢杆菌(Clostridium difficile)属厌氧性细菌，一般寄生在人的肠道内。如果过度服用某些抗生素，艰难梭菌的菌群生长速度加快，影响肠道中其他细菌，引发炎症。该细菌会引起伪膜性肠炎，临床表现为腹泻、腹痛、伴有全身中毒症状，症状突然开始，并伴随血压低，严重时能致死。通常还伴有发烧，白细胞增多，之后可导致死亡，是很严重的一类疾病。该细菌还会引起抗生素相关性腹泻，在体内的潜伏期为5-10天，之后导致大量的棕色或水状腹泻，持续1周左右。除上述疾病外，艰难梭菌尚可引起肾盂肾炎、脑膜炎、腹腔及阴道感染、菌血症和气性坏疽等。近年来该菌已成为医院内感染的病原菌之一，日益被人们所重视，因此快速检测艰难梭状芽孢杆菌具有重要意义。荧光定量PCR是检测传染性疾病的主流技术，本产品就是以染料法荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测艰难梭状芽孢杆菌的试剂盒，它具有下列特点：

即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
引物和探针经过优化，灵敏性高。
提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
特异性高，引物是根据人艰难梭状芽孢杆菌高度保守的VP1区设计，不会跟其他微生物的DNA发生交叉反应。
本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。

本产品只能用于科研。

规格及成分

成分	十孔盒包装
2×Probe qPCR MagicMix	0.5 mL（本色盖）
荧光PCR专用模板稀释液	1 mL（黄盖）
艰难梭状芽孢杆菌PCR引物	100 μL（白盖）
艰难梭状芽孢杆菌qPCR探针	100 μL（棕色管）
艰难梭状芽孢杆菌阳性对照2.0 (1×10E8拷贝/μL)	50 μL（红盖）
DNA释放剂试用装	50次（试用装）
使用手册	1份

运输及保存

低温运输，-20℃保存，保存期限为12个月。

自备试剂

样品DNA。

使用方法

一、稀释标准曲线样品（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。

标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。
在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
换枪头，在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品DNA的制备

如果有N个样品，最好设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。
用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数细菌DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的细菌DNAout或柱式细菌DNAout。本试剂盒免费赠送50次免DNA提取的DNA释放剂，本产品的裂解液可以直接作为PCR模板，省略了DNA提取步骤。、Probe qPCR反应（20μL体系，在样品制备室进行）
如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于标准曲线样品。

在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加）：

成分	样品管 N+2个	PCR阴性对照管	标准曲线样品管（2-7管）
2×Probe qPCR MagicMix（本色盖）	10 μL	10 μL	各10 μL
艰难梭状芽孢杆菌 qPCR探针（绿盖）	2 μL	2 μL	各2 μL
艰难梭状芽孢杆菌 PCR引物混合液（白盖）	2 μL	2 μL	各2 μL
待测样品DNA模板	6 μL	不加	不加
第7步所得标准曲线样品稀释液（2-7号）	不加	不加	各6μL（2号样到2号管，3号样到3号管…）

盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR

过程	温度	时间
预变性	94℃	5 min
PCR反应（40个循环）	94℃	0.5 min
	50℃	0.5 min（采集FAM通道的荧光信号）
	72℃	0.5 min
最后延伸	72℃	min