副猪嗜血杆菌探针法荧光定量 PCR 试剂盒

库存 ：100

英文名 ：Haemophilus parasuis Fluorescent Probe qPCR Kit

CAS号 ：无

保质期 ：1年

供应商 ：优利科（上海）生命科学有限公司

保存条件 ：-20℃

规格 ：50T

副猪嗜血杆菌探针法荧光定量 PCR 试剂盒产品及特点

副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis, HPS)属巴斯德氏菌科嗜血杆菌属，是一种依赖烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)且没有运动性的小型、多形性、革兰氏阴性杆菌。HPS 可引起猪多发性浆膜炎、关节炎，严重时导致体温升高、呼吸困难甚至死亡, 给养猪业带来巨大的经济损失。目前对 HPS 的诊断主要是细菌分离培养和 PCR。HPS 培养需要 NAD、马血清和 5% CO2 环境，需 24-36 小时，还容易出现杂菌污染，因此 PCR 是目前诊断 HPS 最常用的方法。本产品就是以探针法荧光定量PCR 技术为基础开发的专门检测副猪嗜血杆菌的试剂盒它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板。
2. 引物和探针经过优化，灵敏性高。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. 特异性高，引物是根据副猪嗜血杆菌高度保守区设计，不会跟其他病原菌

DNA 发生交叉反应。

1. 本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 PCR 反应。

本产品只能用于科研。



规格及成分
 

成分	编号	十孔盒包装
2×Probe qPCR MagicMix	190303	500 μL（本色盖）
荧光PCR 专用模板稀释液	180701	1 mL（黄盖）
副猪嗜血杆菌探针法 qPCR 引物 混合液	15-11750yw	100 μL（白盖）
副猪嗜血杆菌 qPCR 探针	15-11750pb	50 μL（棕色管）
副猪嗜血杆菌探针法 qPCR 阳性对照(1×10E8 拷贝/μL)	60908-11750pc	50 μL（黄盖）
使用手册	15-11750sc	1 份

运输及保存

低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。

自备试剂

样品 DNA。

使用方法

稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能
污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原， 本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2.  用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液，最好用带芯枪头，
下同）。

1. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
2. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
3. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。二、样品 DNA 的制备
5. 如果有 N 个样品，最好设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性

对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的 10000 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为 NC。

1. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数 DNA 提取试剂盒兼容。

三、Probe qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）

1. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6 个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于 PCR 阳性对照（用第 4 号管的阳性对照稀释液做模板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
2. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好
3. 后最后加）：

   成分	样品管 N+2 个	PCR 阴 性对照管	标准曲线 样品管（2-7 管）
   2×Probe qPCR MagicMix	10 μL	10 μL	各 10 μL
   副猪嗜血杆菌 qPCR 探针	1 μL	1 μL	各 1 μL
   副猪嗜血杆菌探针法 qPCR 引物 混合液	2 μL	2 μL	各 2 μL
   N+2 个待测 DNA 模板	7 μL	-	-
   超纯水	-	7 μL	-
   第 7 步所得标准曲线样品稀释液 （2-7 号）	-	-	各 7 μL（2 号样到 2 号管，3 号样到
   			3 号管…）

1. 盖上盖子后上机，按下面参数进行 PCR：、数据处理
2. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 RNA 浓度的 log 值，再推算出其浓度。
3. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于或等于 30。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性，如果小于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间，则重复一次。若重复结果 Ct
4. 值小于 40，扩增曲线有明显起峰，该样本判断为阳性，否则为阴性。