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库存 :65
英文名 :DNA Extraction Kit(Adsorption column method)
CAS号 :无
保质期 :18个月
供应商 :优利科(上海)生命科学有限公司
保存条件 :2~8℃
规格 :50T
【产品名称】通用名 :DNA提取试剂盒(吸附柱法)
Name :DNA Extraction Kit(Adsorption column method)
【产品介绍】
本试剂盒可以从多种样本中提取基因组DNA,包括动物内脏、肌肉组织、血液以及培养的细胞和细菌等。本法基于对基因组DNA具有高度选择性的高分子膜材料,只需几个步骤即可完成提取过程,在30分钟内完成高纯度DNA的提取。
本试剂盒提取的DNA可以用于Real-time PCR、测序等分子生物学实验。
【产品原理】
动物内脏、肌肉组织、血液以及培养的细胞和细菌等样本在裂解液和蛋白酶K的作用下破碎并可使大部分蛋白质变性,释放出基因组DNA。在其所提供的合适的盐离子和pH环境的作用下,与乙醇混合后,基因组DNA特异性地结合于膜上,大部分蛋白质及其他杂质在两次洗涤过程中被洗下,而DNA与膜结合牢固,在洗脱液的作用下被洗下。
【试剂组成】
名 称 | 规格 |
蛋白酶K | 0.5mL |
裂解液 | 10.0mL |
去蛋白漂洗液 | 11.825mL(第一次使用前加入15.675mL无水乙醇) |
洗涤液 | 11.55mL(第一次使用前加入26.95mL无水乙醇) |
洗脱液 | 10.0mL |
吸附柱 | 50只 |
使用说明书 | 1份 |
【试剂规格】50 T/盒。
【储存运输】蛋白酶K保存于2~8℃。其余成分可室温储存。保存得当可稳定使用18个月。
【自备材料】
灭菌的1.5mL离心管、各种规格灭菌的枪头、离心机(最大转速不小于14,000rpm)、无水乙醇、漩涡震荡器等。
【操作步骤】
蛋白酶K放于2~8℃冰箱保存,使用时取出。
- 样本处理
a)如果全血体积大于200μL,请先使用红细胞裂解液或淋巴细胞分离液收集细胞,然后用200μL PBS缓冲液或生理盐水充分重悬,进行步骤2。
b)如果样本不足200μL,可以加入适量的PBS缓冲液或者生理盐水补足200μL,进行步骤2。
c)从人血液中提取DNA的方法与从哺乳动物血液中提取DNA的方法相同。
d)从鸟类血液中提取的DNA需将不多于20μL血液样本,加PBS缓冲液至200μL,混合后开始提取,进行步骤2。
(2)组织样本:
每份组织分别从不同的三个位置称取1g,用手术剪剪碎混匀后取约50mg置于研磨器中,加入0.5mL-1mL生理盐水研磨,匀浆后转入1.5mL灭菌的离心管,8000rpm离心2分钟,取上清200μL加入1.5mL离心管,进行步骤2。
(3)培养的细胞:
悬浮细胞:细胞培养液3000rpm离心2分钟,去上清,收集2×106个细胞(容积200μL),转移至1.5mL离心管,进行步骤2。
贴壁细胞:去上清,收集2×106个细胞(容积200μL),转移至1.5mL离心管,进行步骤2。
(4)其他液体样本:
1000rpm离心2分钟 ,弃上清,收集沉淀,进行步骤2。
(5)菌液:
培养的菌液,5000rpm离心1分钟,弃上清,收集至少2×106个细菌,进行步骤2。
- 将200μL上述样本和10μL 蛋白酶K加入一只新的1.5mL离心管,然后加入200μL 裂解液,震荡混匀5-10秒。
- 56℃温育10分钟。
- 在上述离心管中加入200μL无水乙醇,充分震荡混匀5-10秒(此步骤不可离心)。
- 将步骤4混匀的液体吸取至一只套有收集管的吸附柱上(注意不要吸到悬浮的杂质,以免阻塞吸附膜),6000-8000rpm离心1分钟,弃去管内液体。
- 将500μL去蛋白漂洗液加入吸附柱中,10000rpm离心30-60秒,弃去管内液体。
- 将700μL 洗涤液加入吸附柱中,10000rpm离心30-60秒,弃去管内液体。
- 将吸附柱放回接液管上,13000rpm离心2分钟。
- 将吸附柱转移到一只干净的1.5mL离心管(不提供)中。
- 向吸附柱内加50-100μL 洗脱液,室温静置1分钟,13000rpm离心1分钟,弃吸附柱,离心管中液体含有基因组DNA。提纯的DNA如果不立刻使用,请保存于-20℃。
【注意事项】
1. 本试剂盒适用于不多于200μL的全血基因组提取,大于200μL的血液建议用红细胞裂解液或淋巴细胞分离液处理后将白细胞富集,然后进行后续操作。
2. 适用于从动物内脏、肌肉组织、血液,以及培养的细胞和细菌等样本提取DNA。
3. 新鲜血液存放于2-8℃中或者-20℃保存。
4. 提取的DNA含量少或者基本没有的原因:
1)样本中细胞过少;2)蛋白酶K没有保存在2-8℃,活性降低。
5.提取鸟类血液时,将样本、蛋白酶K和裂解液混合后液体非常粘稠,需减少样本使用量,20μL鸟类血液加入PBS缓冲液稀释至200μL。
优利科(上海)生命科学有限公司
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