NB1/NB1细胞株/NB1细胞系/NB1人神经母细胞瘤细胞价格

英文名：NB1

CAS号：人神经母细胞瘤细胞

库存：1x10^6/瓶/支

细胞类型：人神经母细胞瘤细胞

品系：NB1

组织来源：人神经母细胞瘤细胞

相关疾病：NB1

物种来源：哺乳动物

免疫类型：详询

细胞形态：贴壁/悬浮

器官来源：人神经母细胞瘤细胞

运输方式：顺丰快递

年限：5年

生长状态：生长良好

NB1/NB1细胞株/NB1细胞系/NB1人神经母细胞瘤细胞

贴壁细胞细胞在培养瓶长成致密单层后，继续生长的空间不足，培养基中的营养成份也消耗较多，同时代谢废物也有较多堆积，需要分瓶培养，对细胞进行传代扩增。

对于贴壁不太紧的细胞如293，可以直接吹散后分瓶。而对于贴壁较紧的细胞如CHO，则需要以胰酶消化后再吹散分瓶，一般过程为（以下操作均按无菌操作的要求进行）：

将长成致密单层细胞的细胞瓶中原来的培养液弃去；

加入0.25%胰酶溶液，视细胞瓶的大小加入体积为0.5ml或更多，以使充分浸润；

一般消化时间约为1至3分钟，肉眼观察瓶壁半透明的细胞层，当见到出现细针孔空隙时，弃去胰酶溶液，并加入适量的细胞培养液终止消化；

视实验要求分入多瓶继续培养，一般为一传二到一传四的比例。

这里，胰酶消化的程度是一个关键：消化过度则对细胞的活性损伤较大，并有部分细胞漂浮，随弃去的胰酶流失；消化不足则细胞难于从瓶壁上吹下，反复吹打同样也会损伤细胞活性。

影响消化速度的因素较多，主要有胰酶溶液的活性（配制条件、冻存或4℃保存时间长短、是否反复冻融、化冻后存放时间及温度等）、消化时的温度（气温、细胞培养瓶及胰酶溶液的温度）以及所加胰酶溶液的多少等。以笔者的经验，以轻吹或加培养液后轻摇可下较好，但对于经验不太充分的实验者而言是较难判断掌握的。下面将细胞生长及不同消化程度的光学显微镜照片列出以供参考。

所用细胞为CHO贴壁细胞，培养基为含10%小牛血清的DMEM-F12，倒置显微镜10X40，数码相机300万像素。

取细胞冻存管一支，于40°C水中速融；25ml细胞方瓶中加入含10%COSMIC小牛血清的DMEM-F12培养基10ml，将冻存管中细胞全部洗入瓶中，置37°C 2.5%二氧化碳孵箱中静置培养。4小时后倒去全部培养基以去除冻存液，更换10ml培养基，同上静置培养。

经24小时培养后，生长情况为：
经48小时培养后，细胞已长成致密单层：

致密单层细胞在细胞瓶上呈雾状，使瓶壁呈半透明：

弃去培养液，在此可先摇动细胞瓶，使老化死亡贴壁情况不好的细胞随培养液弃去。

加入0.25%胰酶后，细胞逐渐皱缩变圆，细胞间隙增大不再致密：

刚加入胰酶，细胞仍呈致密单层：
细胞开始皱缩但不明显，仍维持细胞正常形态：

细胞明显皱缩变小，细胞间隙增大不再致密，部分细胞维持正常形态，部分细胞皱缩变圆：

细胞基本皱缩变圆，此时细胞吹打可下：

细胞完全皱缩变圆，此时应弃去胰酶，加入培养基后轻摇可将细胞从细胞瓶壁上洗下，将细胞悬液用吸管吹散后传代。

有经验后，可肉眼对光观察帖壁半透明的细胞层，判断消化程度。

如消化过头，会见到许多细胞脱落随弃去的胰酶溶液流失。也可以在倒数第二、三步时弃去胰酶，用瓶中残留的胰酶继续作用至最后一步的消化程度，这样略有点过也影响不大

一、L- 谷氨酰胺（L-Glutamine）是什么？我的细胞培养需要加 L- 谷氨酰胺吗？为什么培养条件信息中没有列出？我应该加多少 L-谷氨酰胺？

L- 谷氨酰胺是几乎所有哺乳动物和昆虫细胞在培养过程中所必需的氨基酸。它是许多细胞培养基的重要组成部分，参与蛋白质的合成和核酸代谢，是细胞培养的主要能量来源。所有 ATCC 配方的经典细胞培养基都含有 L-谷氨酰胺。因此，如果一个细胞系按照 ATCC 培养条件来培养，它是已经含有 L-谷氨酰胺了。如果您购买的培养基中不含 L-谷氨酰胺，则必须在使用前将其无菌添加到培养基中。在添加更多 L-谷氨酰胺之前，一定要检查基础培养基的配方。哺乳动物细胞的 L-谷氨酰胺浓度在 0.68 mM（199 培养基）到 4 mM（Dulbecco 改良 Eagle 培养基）之间变化。

二、什么是非必需氨基酸 (NEAA)？为什么要添加到细胞培养基中？

NEAA(非必需氨基酸) 是含几种非必需氨基酸的合剂，理论上添加 NEAA 要比不加的好。所有培养基配方均含有 10 种必需氨基酸以及半胱氨酸、谷氨酰胺和酪氨酸。在一些培养基配方中加入其他非必需氨基酸-丙氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、甘氨酸、谷氨酸、脯氨酸和丝氨酸-可减少细胞的代谢负担，从而增加细胞增殖。有些培养基已经添加了非必需的氨基酸。或者，非必需氨基酸可作为无菌溶液（通常为 10 mM；100X）单独制备。

三、为什么有的客户要求培养基中不含酚红？

酚红在培养基中用作 pH 指示剂。在较低的 pH 值下，它会使培养基变黄，而在较高的 pH 值下，它会使培养基变紫。对于大多数培养基（pH7.4），呈鲜红色。不幸的是，酚红可以模仿一些类固醇激素的作用，特别是雌激素。一般研究雌激素敏感细胞，如乳腺组织，使用不含酚红的培养基。此外，当酚红包含在一些无血清制剂中时，钠钾离子的稳定状态被破坏；这种影响通过在培养基中加入血清或牛垂体激素而被中和或减轻。做流式细胞检测时经常不使用加有酚红的培养基，因为它的颜色会干扰检测。

五．细胞培养基中的 HEPES 缓冲液，我可以在细胞培养基中使用 HEPES 缓冲液吗？

HEPES和其他有机缓冲液可以有效地用于许多细胞系. 但是，请注意，该化合物可能是有毒的，特别是对于某些分化的细胞类型，因此应在常规使用前评估其效果。HEPES 也被证明能大大提高介质对暴露在荧光灯下引起的光毒性效应的敏感性。

六．β-巯基乙醇在细胞培养中起什么作用？

β-巯基乙醇被添加到淋巴细胞或其他细胞培养物中，因为用于培养基的 FBS 中的氨基酸半胱氨酸短缺，而存在大量的胱氨酸。一些像 T 细胞这样的细胞不能将胱氨酸运输到细胞质中，在那里它必须转化为半胱氨酸。β-巯基乙醇将胱氨酸还原为可被细胞转运的形式，然后转化为细胞生长所需的半胱氨酸。β-巯基乙醇也是一种还原剂，可以分解培养细胞产生的许多有毒代谢物，改善细胞周围的环境。

七．霍乱毒素（cholera toxin）是什么？为什么用在细胞培养基中？