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库存 :100
英文名 :Diagnostic Kit for Avian Influenza Virus subtype H5N1 RNA (Real-Time PCR Method)
CAS号 :无
保质期 :1年
供应商 :优利科(上海)生命科学有限公司
保存条件 :-20℃
规格 :50T
禽流感病毒H5N1 亚型(AIV-H5N1)核酸检测试剂盒 (荧光-PCR 法)
【产品名称】
商品名称:禽流感病毒 H5N1 亚型(AIV- H5N1)核酸检测试剂盒(荧光-PCR 法)Name :Diagnostic Kit for Avian Influenza Virus subtype H5N1 RNA (Real-Time PCR Method)
【包装规格】48T/盒
【预期用途】
本试剂盒适用于检测标本中的禽流感病毒 H5N1 亚型 RNA,适用于禽流感病毒 H5N1 亚型感染的辅助诊断及流行病学调查,其检测结果仅供参考。【检验原理】
本试剂盒用禽流感病毒 H5N1 亚型的特异性引物,分别结合一条特异性荧光探针,用一步法荧光 RT-PCR 技术对禽流感病毒 H5N1 亚型 RNA 进行体外扩增检测, 用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。【试剂组成】
名 称 | 规 格 |
酶液 | 50μL×1 管 |
AIV-H5N1 反应液 | 1.0mL×1 管 |
AIV-H5N1 阳性质控品 | 50μL ×1 管 |
阴性质控品 | 250μL ×1 管 |
【储存条件及有效期】
-20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融少于 7 次,有效期 9 个月。【适用仪器】
ABI 7300、7500、ABI stepone / stepone plus 、安捷伦 MX3000P/3005P、MJ Opticon2、Eppendorf 2/4 Color Systems、Bio-RadCFX96、Roche Gene 6000、Roche LC480 等荧光定量 PCR 检测仪。【标本采集】
病死或扑杀禽,取喉气管、脑、胸肌、心肌和肺等组织;待检活禽,用棉拭子 取呼吸道分泌物或排泄物,置于 1mL 50%甘油生理盐水中。【保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过 6 个月,标本运送应采用 2~8℃冰袋运输,严禁反复冻融。【使用方法】
- 样品处理(样本处理区)
- 样本前处理
-
- RNA 提取
- 试剂配制(试剂准备区)
试剂 | AIV-H5N1 反应液 | 酶液 |
用量 | 20μL | 1μL |
- 加样(样本处理区)
- PCR 扩增(核酸扩增区)
- 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内;
- 设置好通道、样品信息,反应体系设置为 25μL;荧光通道选择: 检测通道
请勿选择 ROX 参比荧光。
-
- 推荐循环参数设置:
步骤 | 循环数 | 温度 | 时间 | 收集荧光信号 |
1 | 1cycle | 42℃ | 20min | 否 |
2 | 1 cycle | 95℃ | 10min | 否 |
3 | 40 cycle | 94℃ | 15sec | 否 |
55℃ | 30sec | 是 |
- 结果分析判定
- 结果分析条件设定
-
- 结果判断
阳性:检测通道 Ct 值≤35.0,且曲线有明显的指数增长曲线。
可疑:检测通道 Ct 值>35.0,且出现典型扩增曲线的样本建议重复试验,重复试验结果出现 Ct 值≤35.0 和典型扩增曲线者为阳性,否则为阴性。
阴性:样本检测结果无 Ct 值且无明显的扩增曲线。
- 检测方法的局限性
- 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关;
- 样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;
- 阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;
- 病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;
- 不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;
- 试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果;
- 本检测结果仅供参考,如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
- 质控标准
阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且 Ct 值≤32; 以上条件应同时满足,否则实验视为无效。
【注意事项】
- 所有操作严格按照说明书进行;
- 试剂盒内各种组分使用前应自然融化,完全混匀并短暂离心;
- 反应液应避光保存;
- 反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;
- 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;
- 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;
- 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;
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