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文献和实验
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库存 :48T/96T
供应商 :B&H(博辉生物)
检测限 :详询
检测方法 :双抗夹心法
应用 :定性、定量检测
适应物种 :小鼠
标记物 :无
样本 :血清、血浆、细胞上清、尿液等
小鼠睾酮受体(TR)ELISA试剂盒/小鼠睾酮受体(TR)ELISA试剂盒样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
- 酶标仪(450nm)
- 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
- 37℃恒温箱
操作注意事项
- 试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
- 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
- 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5倍,最终结果乘以5才是样本实际浓度。
- 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
- 所有液体组分使用前充分摇匀。
大鼠泛素C末端水解酶L1(Uch-L1)/泛素C末端水解酶L1(Uch-L1)ELISA试剂盒
试剂盒组成
名称 | 96孔配置 | 48孔配置 | 备注 |
微孔酶标板 | 12孔×8条 | 12孔×4条 | 无 |
标准品 | 0.3mL*6管 | 0.3mL*6管 | 无 |
样本稀释液 | 6mL | 3mL | 无 |
检测抗原-HRP | 10mL | 5mL | 无 |
20×洗涤缓冲液 | 25mL | 15mL | 按说明书进行稀释 |
底物A | 6mL | 3mL | 无 |
底物B | 6mL | 3mL | 无 |
终止液 | 6mL | 3mL | 无 |
封板膜 | 2张 | 2张 | 无 |
说明书 | 1份 | 1份 | 无 |
自封袋 | 1个 | 1个 | 无 |
操作步骤
- 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
- 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
- 样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。
- 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗原100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
- 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
- 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
- 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。
试剂盒性能
- 准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。
- 灵敏度:最低检测浓度小于0.1 U/mL。
- 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
- 重复性:板内、板间变异系数均小于15%。
- 贮藏:2-8℃,避光防潮保存。
- 有效期:6个月
- 试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或人体实验,否则所产生的一切后果,由实验者承担,本公司概不负责。
- 严格按照说明书操作,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。免疫组化技术的基本原理
免疫组化技术是一种综合定性、定位和定量;形态、机能和代谢密切结合为一体的研究和检测技术。在原位检测出病原的同时,还能观察到组织病变与该病原的关系,确认受染细胞类型,从而有助于了解疾病的发病机理和病理过程。
免疫酶组化技术是通过共价键将酶连接在抗体上,制成酶标抗体,再借酶对底物的特异催化作用,生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒,于普通显微镜或电镜下进行细胞表面及细胞内各种抗原成分的定位,根据酶标记的部位可将其分为直接法(一步法)、间接法(二步法)、桥联法(多步法)等,用于标记的抗体可以是用免疫动物制备的多克隆抗体或特异性单克隆抗体,最好是特异性强的高效价的单克隆抗体。直接法是将酶直接标记在第一抗体上,间接法是将酶标记在第二抗体上,检测组织细胞内的特定抗原物质。目前通常选用免疫酶组化间接染色法。
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