N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶NAG测试盒

N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶NAG测试盒

价格: ¥1322

品牌:mlBio/酶联生物 品牌认证

货号:ml2912

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库存 :112

英文名 :N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶NAG测试盒

保质期 :12个月

供应商 :上海酶联生物科技有限公司

保存条件 :避光,低温保存

规格 :100管/48样


N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶NAG测试盒
微量法
注    意:
正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

葡萄糖苷酶NAG测试盒

测定意义:
NAG是溶酶体中的一种酸性水解酶,广泛存在于各种组织、体液和细胞中,以前列腺和肾近曲小管细胞内含量。NAG活性变化与机体某些病理状态密切相关。

测定原理:
NAG分解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成对-硝ji苯酚,后者在400nm有大吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算NAG活性。

自备用品:
酶标仪/可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制:
提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:粉剂×1瓶,-20℃保存;临用前加入2.5mL蒸馏水,充分溶解备用;用不完的试剂仍-20℃保存。
试剂二:液体4mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体13mL×1瓶,4℃保存。

粗酶液提取:
1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);15000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆)样品:直接检测。

测定步骤:
1、酶标仪或分光光度计预热30min以上,调节波长至400nm,蒸馏水调零。
2、样本测定(在EP管或96孔板中依次加入下列试剂):
试剂名称(μL 测定管 对照管
试剂一 25  
蒸馏水   25
试剂二 35 35
样本  10 10
                                  迅速混匀,放入37保温30min
试剂三 130 130
充分混匀, 400nm处测定吸光值A,计算ΔA=A测定-A对照。每个测定管需设一个对照管。

葡萄糖苷酶NAG测试盒

N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶NAG测试盒
NAG活性计算:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、标准条件下测定的回归方程为y = 0.00585x +0.0083;x为标准品浓度(nmol/mL),y为吸光值。
2、血清(浆)NAG活力的计算
单位的定义:每mL血清(浆)每分钟产生1nmol对-硝ji苯酚定义为一个酶活性单位。
NAG活力(nmol /min/mL)= [(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V反总]÷V样÷T =39.89×(ΔA-0.0083)
3、细胞、细菌和组织中NAG活力的计算
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟产生1nmol对-硝ji苯酚定义为一个酶活性单位。
NAG活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V反总]÷(V样×Cpr)÷T
=39.89×(ΔA-0.0083) ÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每g组织每分钟产生1nmol对-硝ji苯酚定义为一个酶活性单位。
NAG活性(nmol/min/g鲜重)= [(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T
=39.89×(ΔA-0.0083)÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟产生1nmol对-硝ji苯酚定义为一个酶活性单位。
NAG活性(nmol/min /104cell) =[(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V反总]÷(500×V样÷V样总)÷T 
=0.08×(ΔA-0.0083)
V反总:反应体系总体积,0.07mL;V样:加入反应体系中样本体积,0.01mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g; 500:细胞或细菌总数,500万;T:反应时间,30min。
b.用96孔板测定的计算公式如下
1、标准条件下测定的回归方程为y = 0.0039x +0.0083;x为标准品浓度(nmol/mL),y为吸光值。
2、血清(浆)NAG活力的计算
单位的定义:每mL血清(浆)每分钟产生1nmol对-硝ji苯酚定义为一个酶活性单位。
NAG活力(nmol /min/mL)= [(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V反总]÷V样÷T =59.83×(ΔA-0.0083)
3、细胞、细菌和组织中NAG活力的计算
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟产生1nmol对-硝ji苯酚定义为一个酶活性单位。
NAG活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V反总]÷(V样×Cpr)÷T
=59.83×(ΔA-0.0083) ÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每g组织每分钟产生1nmol对-硝ji苯酚定义为一个酶活性单位。
NAG活性(nmol/min/g鲜重)= [(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T
=59.83×(ΔA-0.0083)÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟产生1nmol对-硝ji苯酚定义为一个酶活性单位。
NAG活性(nmol/min /104cell) =[(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V反总]÷(500×V样÷V样总)÷T 
=0.12×(ΔA-0.0083)
V反总:反应体系总体积,0.07mL;V样:加入反应体系中样本体积,0.01mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g; 500:细胞或细菌总数,500万;T:反应时间,30min。

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