还原糖含量测试盒

库存 ：101

英文名 ：还原糖含量测试盒

保质期 ：12个月

供应商 ：上海酶联生物科技有限公司

保存条件 ：避光，低温保存

规格 ：100管/48样

还原糖含量测试盒
微量法
注    意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。



测定意义：
还原糖广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。植物体内的还原糖主要包括葡萄糖、果糖和麦芽糖等，是常见的单糖和双糖，其中葡萄糖和果糖不仅是呼吸作用的主要底物，也是进一步合成蔗糖、淀粉和纤维素的底物。

测定原理：
加热促进碱性溶液中3,5-二硝基水杨酸溶液与还原糖生成棕红色氨基化合物，在540nm有特征吸收峰；在一定的浓度范围内，还原糖含量与540nm吸光度成线性关系，根据标准曲线，即可求出样品中还原糖的量。

需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、蒸馏水。

试剂的组成和配制：
试剂一：100mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：8mL×1瓶 ，4℃保存；

样品中还原糖的提取：
1、细菌或细胞的处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3S，间隔10S，重复30次），转移到有盖离心管中（防止加热时水分散失），80℃水浴中40min并且振荡8~10次，8000g，25℃离心10min，取上清供测定用。
2、组织的处理：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一），冰浴匀浆，转移到有盖离心管中（防止加热时水分散失），80℃水浴中40min并且振荡8~10次，8000g 吧，25℃离心10min，取上清供测定用。
3、血清（浆）的处理：按照血清（浆）体积（mL）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议取0.1mL血清（浆）加入1mL试剂一），冰浴匀浆，转移到有盖离心管中（防止加热时水分散失），80℃水浴中40min并且振荡8~10次，8000g，25℃离心10min，取上清供测定用。

测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。
2、调节水浴锅至95℃。
3、在EP管中加入下列试剂：
  

试剂（μL）	对照管	测定管
样本	175	175
试剂二		125
蒸馏水	125

混匀，在95℃水浴中加热5min（盖紧，防止水分散失），取出后立即冷却至室温，混匀。取200μL 至微量石英比色皿或96孔板中，540nm波长下读取对照管和测定管吸光值。计算ΔA=A测定-A对照。每个测定管需设一个对照管。
注意：如果ΔA大于2，需要将样本用试剂一稀释，计算公式中乘以相应稀释倍数（若显色后出现分层现象，可改用蒸馏水稀释）。



还原糖含量测试盒
还原糖含量计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、标准条件下测定回归方程为y = 8.3796x- 0.3034；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。
2、按样本鲜重计算：
还原糖(μg/g鲜重)=[1000×(ΔA＋0.3034)÷ 8.3796×V1]÷(W×V1÷V2)=119.34×(ΔA＋0.3034)÷W
3、按样本蛋白浓度计算：
还原糖(μg/mg prot)=[1000×(ΔA＋0.3034)÷ 8.3796×V1]÷(V1×Cpr)=119.34×(ΔA＋0.3034)÷Cpr
4、按细菌或细胞密度计算：
还原糖(μg /104 cell)=[1000×(ΔA＋0.3034)÷ 8.3796×V1]÷（500×V1÷V2）=0.239×(ΔA＋0.3034)
5、按血清（浆）体积计算：
还原糖(μg/mL)=[1000×(ΔA＋0.3034)÷ 8.3796×V1]÷（V3×V1÷V2）=1193.4×(ΔA＋0.3034) 
1000：1mg/mL=1000µg/mL；V1：加入样本体积，0.175mL；V2：加入试剂一体积，1 mL；V3：加入血清（浆体积），0.1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
b.用96孔板测定的计算公式如下
1、标准条件下测定回归方程为y = 4.1898x - 0.3034， R2 = 0.9997；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。
2、按样本鲜重计算：
还原糖(μg/g鲜重)＝[1000×(ΔA＋0.3034)÷4.1898×V1]÷(W×V1÷V2)=238.67×(ΔA＋0.3034)÷W
3、按样本蛋白浓度计算：
还原糖（μg/mg prot）= [1000×(ΔA＋0.3034)÷4.1898×V1]÷(V1×Cpr)=238.67×(ΔA＋0.3034)÷Cpr
4、按细菌或细胞密度计算：
还原糖（μg/104 cell）= [1000×(ΔA＋0.3034)÷4.1898×V1]÷（500×V1÷V2）=0.477×(ΔA＋0.3034)
5、按血清（浆）体积计算：
还原糖（μg/mL）＝[1000×(ΔA＋0.3034)÷4.1898×V1]÷（V3×V1÷V2）=2386.7×(ΔA＋0.3034)
1000：1mg/mL=1000µg/mL；V1：加入样本体积，0.175mL；V2：加入试剂一体积，1 mL；V3：加入血清（浆体积），0.1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
注意：低检测限为1mg/g鲜重或10μg/mg prot