酸性磷酸酶ACP活性测定试剂盒

库存 ：69

英文名 ：酸性磷酸酶ACP活性测定试剂盒

保质期 ：12个月

供应商 ：上海酶联生物科技有限公司

保存条件 ：避光 , 低温保存

规格 ：50管/24样

酸性磷酸酶ACP活性测定试剂盒
分光光度法 
注    意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：                           
ACP在酸性条件下催化磷酸单酯水解称无机磷酸，常见于巨噬细胞的溶酶体内。ACP常用于前列腺癌的辅助诊断。

测定原理：
在酸性环境中，ACP催化对硝ji苯磷酸二钠水解生成4-硝ji苯酚，在405nm有特征光吸收；通过测定405nm吸光度增加速率，来计算ACP活性。

自备仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、分析天平、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、冰、可调式移液器和蒸馏水。



试剂组成和配制：
试剂一：液体60mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体25mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体25mL×1瓶，4℃保存。

粗酶液提取：
1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆，4℃、10000g离心10min，取上清液待测。
2.细菌或细胞：按照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3.血液可直接测定，或者适当稀释后测定。

测定：
1. 分光光度计预热30 min，调节波长到405 nm。
2. 在 EP 管中加入下列试剂

试剂名称（μL）	测定管	对照管
样本	10	10
试剂一	90	990
试剂二	900
30℃避光保温30 min
试剂三	400	400

混匀，吸取 1 mL 加入玻璃比色皿中，405 nm 下测定各管吸光值。ΔA=A测定管-A对照管。
注意：每个测定管需做一个对照管。

酸性磷酸酶ACP活性测定试剂盒
ACP活性计算：
标准曲线 y = 14.6672x + 0.0179；R2 = 0.9996；x为标准品浓度（μmol/mL），y为吸光值ΔA。
1. 血液中ACP活性计算
活性单位定义：30℃中每毫升血液每分钟催化产生1μmol 4-硝ji苯酚定义为1个酶活单位。
ACP活力(μmol/min/mL)=（ΔA-0.0179）÷14.6672 ×V反总÷T÷V样= 0.2273 ×（ΔA-0.0179）
2. 组织、细菌或细胞中ACP活性计算
（1）按照蛋白浓度计算
活性单位定义：30℃中每毫克蛋白每分钟催化产生1 μmol 4-硝ji苯酚定义为1个酶活单位。
ACP活力(μmol/min/mg prot)=(ΔA-0.0179)÷14.6672×V反总÷T÷(V样×Cpr)=0.2273 ×（ΔA-0.0179）÷Cpr
（2）按照样本质量计算
活性单位定义：30℃中每克组织每分钟催化产生1 μ mol 4-硝ji苯酚定义为1个酶活单位。
ACP活力 (μmol/min/g 鲜重)=(ΔA-0.0179)÷14.6672×V反总÷T÷(W×V 样÷V 样总)= 0.2273 ×（ΔA-0.0179）÷W
（3）按照细菌或细胞数量计算
活性单位定义：30℃中每104个细菌或细胞每分钟催化产生1 μ mol 4-硝ji苯酚定义为1个酶活单位。
ACP活力 (μmol/min/104 cell)=(ΔA-0.0179)÷14.6672 ×V反总÷T ÷（细胞数量×V 样÷V 样总）= 0.2273 ×（ΔA-0.0179）÷细胞数量
V反总：反应体系总体积（mL），1 mL； W ：样品质量，g； V样：加入反应体系中样本体积（mL），0.01 mL；V样总：提取液体积，1 mL；T：反应时间（min），30 min；500：细胞或细菌总数，500万。

注意事项：
ACP不稳定，尤其在37℃和pH大于7的条件下活力丧失快，因此酸性磷酸酶样品一般需当天准备；血清样品中，每毫升血清中加入10mg柠檬酸氢二钠或者5mg硫suan氢钠，使pH降至6.5以下，或5ml血清加入30%醋suan溶液2～3滴，置于4℃可保存1周。