产品详情
文献和实验
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保存条件 :零下80℃
保质期 :一年
库存 :1000
供应商 :智立中特(武汉)生物科技有限公司
[名称首字母] P[载体宿主] 大肠杆菌
[原核抗性] Kan
载体基本信息
载体名称:pUSH2
生长条件:37°C 1 day(s)
生物安全等级:1级
宿主菌:枯草芽孢杆菌大肠杆菌
载体类型:质粒
复制子:
pMB1, pUB110
抗性:卡那
启动子:PN25
建议宿主菌:大肠杆菌rec菌株
载体大小(kb):5.8
多克隆位点:是
参考文献:
P351
Sch@0246n, U. and W. Schumann. 1994. Construction of His!6-tagging vectors allowing single-step purification of GroES and other polypeptides produced in Bacillus subtilis. Gene 147: 91-94.
质粒菌株产品操作说明书
扩增流程
收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必先转化提质粒后使用)
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μlddH2O去离子水溶解质粒;
②取1支100μl感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;(从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作)
③加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min;
④6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;(可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布,可以比传统涂布方法获得更多转化子)
⑤将平板正向培养1h,再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h;
(菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另外不要直接转表达感受态,要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态)
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种(冰袋运输,存于-80℃,保质期90天,请务必划线挑单克隆培养)
四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏再四区划线,再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒(冰袋运输,存于-20℃,保质期90天)
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒(常温运输,存于-20度,保质期90天,请务必先转化提质粒后使用)
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中,加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min,吸取5ul质粒转化,离心全涂。
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