CRISPR/Cas9敲除细胞系构建服务

CRISPR/Cas9敲除细胞系构建服务

价格: 询价

产品详情

相关推荐

提供商 :卡梅德生物科技(天津)有限公司

服务名称 :CRISPR/Cas9敲除细胞系构建服务

规格 :/

CRISPR/Cas9敲除细胞系构建服务

        卡梅德生物(KMD Bioscience)多年来致力于细胞生物学技术研究。建立了完善的细胞实验服务平台,提供一体化的工业生产式技术服务,我们与国内知名研发单位合作推出完备的CRISPR/Cas9载体系统,包括单敲除、双敲除、缺口酶、慢病毒敲除载体和敲除载体库等体系,并且每一个载体系统都有不同的标签(EGFP/RFP/Puro/Neo)可供选择,能够为客户提供快速、准确的基因敲除项目服务。卡梅德生物依托先进的技术和经验丰富的科研团队,可为客户提供系统的CRISPR/Cas9敲除细胞系构建服务。
       CRISPR/Cas9(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)是新出现的一种由sgRNA指导Cas核酸内切酶对靶向基因进行特定DNA修饰的技术。CRISPR/Cas9系统广泛存在于原核生物基因中,是细菌和古细菌为应对病毒和质粒不断攻击而演化来的一种适应性免疫防御机制。在这些生物体中,来自噬菌体的外源遗传物质获得和整合入CRISPR位点。这些序列特异的片段被转录成短CRISPR的RNA(CRISPR-derivedRNA),crRNA通过碱基配对与tracrRNA(trans-activating RNA)结合形成双链RNA,然后tracrRNA/crRNA复合体指导Cas9蛋白切断双链DNA。
利用CRISPR/Cas9技术能够进行目的基因敲除细胞系的构建。该技术通过RNA指导Cas9核酸酶对靶向基因进行特定DNA编辑。CRISPR-Cas9系统的基因编辑效率更高,Cas9系统的载体构建与使用也更加便捷,随着CRISPR/Cas9技术的不断发展,该技术已广泛应用在各物种中,是目前普遍使用的基因编辑技术。
CRISPR/Cas9系统技术:
 
  CRISPR/Cas9技术
实验原理 * 该技术的工作原理是:噬菌体等外源DNA入侵时,Cas蛋白复合物通常识别 3' 端含NGG的前间隔序列邻近基序 (PAM) 区域。然后,侵入的噬菌体或质粒释放的短DNA片段,插入宿主 CRISPR 位点中。在II型CRISPR系统中,CRISPR RNA(crRNA)通过碱基配对与转录激活crRNA(Trans-activating crRNA,tracrRNA)退火形成能够特异识别基因组序列的复合体,然后通过PAM(5’-NGG-3’)序列结合并侵入DNA,引导Cas9核酸内切酶在目的片段生成DNA双链断裂(double-strand breaks,DSBs)。 这个识别复合体可以通过融合crRNA与tracrRNA序列形成sgRNA(single-guided RNA)进行简化。融合的RNA具有与野生型RNA类似的活力,但由于结构得到了简化,更方便研究者使用。通过电刺激转染的方法直接将Cas9蛋白和sgRNA复合物转染到细胞中,便能够对目的基因进行操作。
优点 * 具有编辑效率高、构建简单、操作方便等优点
* 使用更加严苛的筛选标准,可以更有效地去除假阳性
* 能够成本低廉地实现有效灵活的基因敲除
* 具有广谱性,无基因、细胞及物种限制
* 可实现多个靶位点同时进行基因打靶
* 功能丰富,可实现敲除、插入、抑制、激活等多种目的基因



项目流程:
 
 
 

 

应用范围

 
微生物 乳酸菌沙门氏菌大肠杆菌毕赤酵母酿酒酵母不动杆菌白色念珠菌铜绿假单胞菌肺炎克雷伯菌地衣芽孢杆菌枯草芽孢杆菌解淀粉芽孢杆菌,等
植物 大豆小麦烟草苜蓿玉米棉花甜瓜西瓜水稻黄瓜番茄拟南芥马铃薯,等

服务优势
  • 能够准确的敲除指定的基因,提高基因敲除效率:在稳定表达Cas9蛋白的细胞系上进行基因敲除比瞬时转染Cas9进行基因敲除的效率更高;
  • 可对同一细胞进行多个基因敲除实验:对于需要在同一个细胞系中进行多个基因的编辑或需要长期用一个细胞模型进行多项基因研究,先构建一个Cas9蛋白稳定表达的细胞系可显著提高后续实验的效率,降低实验难度;
  • 提供多种不同荧光和抗性标记的表达载体,更易筛选到基因敲除成功的细胞;
  • 经验丰富的实验技术人员,GMP级的操作水平,实验体系成熟,数据结果交付周期快,成功率高,可为您提供高品质的技术服务;
  • 系统稳、脱靶低、性价比高,服务透明化;
  • 具备完善的细胞、蛋白等服务平台,能够提供从gRNA设计到蛋白检测等一站式技术服务

公司介绍:

卡梅德生物科技(天津)有限公司作为国家高新技术企业,专注于为全球科学家和研究机构提供天然蛋白提取与发酵、重组蛋白定制表达服务,单、多克隆抗体开发,噬菌体文库构建与筛选服务;同时,基于我公司成熟的五大核心技术服务平台,成功研发了众多用于科学研究的重组蛋白、抗体、抗体药物靶点蛋白、工业酶、诊断原料等相关试剂。

核心平台:

---噬菌体抗体展示技术平台


卡梅德生物科技有限公司利用自有的噬菌体(M13,T7噬菌体)展示技术平台,能够为客户提供高性价比的重组VHH抗体(纳米抗体/驼类纳米抗体)制备方案,包括动物免疫,文库建立,文库筛选以及重组抗体的体外表达等。

 

---抗体工程技术平台

卡梅德生物科技的抗体工程平台包含单克隆抗体制备服务平台,多克隆抗体制备服务平台,抗体测序与改造平台。 单克隆抗体制备平台:基于杂交瘤技术的小鼠单抗技术平台,能够在2-3个月获得高亲和力与高特异性的单克隆抗体,同时基于噬菌体展示技术,我司能够制备多物种的重组单克隆抗体,包括小鼠,兔子,骆驼,羊驼以及人单抗。

多克隆抗体制备服务平台:能够为客户提供兔多抗,羊多抗,骆驼类多抗,牛多抗等多物种的抗体制备服务,根据不同的抗原类型,来自卡梅德生物的抗体专家会为您量身定做适合您需求的方案,以满足您的项目要求并节省您的宝贵时间。

抗体一级序列测序平台:为满足大量客户对抗体基因序列与氨基酸序列信息的需求,我们为客户提供De Novo抗体全长氨基酸序列解析和N端测序服务;同时我们设计积累多达80种杂交瘤抗体基因测序引物。

抗体改造技术平台:卡梅德生物技术的抗体改造平台包括嵌合抗体制备,抗体亲和力成熟以及抗体人源化服务。目前我们已经成功制备十几例嵌合抗体与人源化抗体,均成功交付。

 

---蛋白表达与纯化服务技术平台

卡梅德生物科技目前拥有四大蛋白表达平台,能为客户提供优质的蛋白表达技术服务。

哺乳动物表达平台: 目前公司拥有Freestyle CHO,Expi CHO,CHO-DG44,HEK293F,Vero等细胞系用于蛋白表达制备。公司秉承质量优先原则,全部统一采用Gibco细胞培养基和相关转染配套试剂,以保证每个批次的哺乳动物细胞蛋白表达产品高质量、高表达水平的交付。同时公司拥有的表达载体体系,相比市面常用蛋白表达载体,能够为客户提供更高纯度的蛋白。

昆虫细胞表达平台:目前公司常采用的昆虫表达细胞为SF9,配套使用的是来自Gibco的培养基,只为更快、更好地为客户提供高质量的产品。利用该蛋白表达平台,我们已经成功制备了多种人源跨膜蛋白,包括多种GPCR家族成员蛋白。

原核蛋白表达平台:大肠杆菌(E.coli)重组蛋白表达技术经过多年的发展,已经积累了很多的经验。但如果要在大肠杆菌表达体系获得不错的可溶以及高产量的蛋白表达,一个全方位设计的表达策略必不可少。卡梅德生物科技的专家团队在蛋白表达和抗体制备方面具有丰富的经验和知识储备,针对每位客户的需求,我们的都会提供具体的方案设计。

酵母蛋白表达平台:毕赤酵母,酿酒酵母等蛋白表达体系,适用于需要真核表达蛋白,同时兼具产量与性价比的项目需求特点。

植物表达平台:为了提供更好的服务,卡梅德生物携手国内重点科研单位共同为客户提供基因烟草瞬时转染技术的植物蛋白表达服务,项目从设计构建到蛋白表达只需要4-6周。该技术平台能够为客户在较短的时间内获得高纯度,高质量的植物来源的蛋白,已解决大部分植物蛋白在上述几大蛋白表达系统中不溶或不表达的难题。

---蛋白批量发酵平台

超高密度发酵技术:卡梅德生物科技能够为客户提供5L,10L,30L,80L体积的贴壁细胞高密度发酵技术服务(微载体贴壁培养技术),人源细胞贴壁细胞培养密度高达4x106个/ml,适用于病毒转染类型的蛋白高产量表达发酵,能够做到1g/L发酵水平。利用该技术平台,我们目前完成的重组抗体发酵表达记录高达4.7g/L发酵水平。

同时,借助有氧发酵技术,我们能够为客户提供原核和酵母的超高密度发酵服务,采用有氧发酵类型的原核发酵技术,蛋白产量比传统的原核发酵要高(相差接近100倍蛋白产量和得率)。

---蛋白纯化技术平台:

我司分别配制了Akta和BioRad Biological的蛋白纯化仪,同时拥有GE全套填料,包括Sphedax 75/200,500, G25,G100,CMFF,Q-FF,DEAE以及不同规格的预装柱等,能够在1-2周内为客户完成一套蛋白纯化的工艺开发小试方案。我司的科研团队成员均来自国内生物制药企业,硕士博士学历占比98%,因此有能力为客户提供快速,高质量天然蛋白和跨膜蛋白的纯化等优质服务。

 

---稳定细胞系筛选平台与基础分子生物平台

稳定细胞系构建平台:卡梅德生物可为客户定制不同类型的稳定细胞系构建与筛选服务,如利用Crisper/Cas9的多物种、多细胞系来源的细胞沉默,敲除,过表达等稳定细胞系;同时我们也为客户提供基于电转或脂质体转染(Lipofectin2000/3000)的稳定转染细胞系构建服务,如CHO细胞蛋白高表达细胞株等。

卡梅德生物的基础分子生物学平台承担了包括基因克隆,蛋白定量,免疫印迹检测(SDS-PAGE、WB),宿主核酸检测,蛋白抗体亲和纯化,ELISA操作,内毒素检测,HPLC分析,免疫组化,IP,免疫浊度,流式细胞术等服务。



 

卡梅德生物科技(天津)有限公司

实名认证

金牌会员

入驻年限:4年

联系人:张经理

地址:天津

电话联系

立即询价

换一个