pVAX1哺乳表达质粒价格_品牌:Xybio-丁香通官网

保存条件：-20

保质期：2年

英文名：pVAX1

库存：100

供应商：上海烜雅生物科技有限公司

CAS号：/

规格：干粉/液体

基本信息
名称：pVAX1哺乳表达质粒
别称: pVAX1

启动子:	CMV
复制子:	pUC
终止子:	BGH poly（A）signal
质粒分类:	哺乳细胞载体;蛋白过表达质粒
质粒大小:	2999bp
原核抗性:	Kan
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度
表达宿主:	哺乳细胞293T
培养条件:	37℃，5%CO2
诱导方式:	无需诱导
5'测序引物:	CMV-F: CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG
3'测序引物:	BGH-R: TAGAAGGCACAGTCGAGG
备注:	真核表达

质粒属性

荧光蛋白：
载体宿主：	哺乳细胞
载体用途：	蛋白表达
基因种属：	空载体
基因类型：	ORF
原核抗性：	Kan
真核抗性：

质粒简介
本载体的特征是允许在大肠杆菌(Escherichia coli)中进行高拷贝复制和在哺乳动物(mammal;mammalian)细胞中高水平的瞬时表达蛋白。载体包含下列元素：
•人巨细胞病毒（CMV）立即早期启动子，使得本载体可以在大部分的哺乳动物(mammal;mammalian)细胞中进行高水平基因表达
•牛生长激素（BGH）多聚腺苷酸化信号能够保证高效的转录终止和mRNA的poly A结构。
•在大肠杆菌(Escherichia coli)中是用卡那抗性进行修改载体筛选。
•质粒pVAX1/lacZ是用来作为细胞系目的基因转染和表达的阳性对照。
质粒图谱

质粒序列
LOCUS       Exported                2999 bp ds-DNA     circular SYN 18-九月-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS    Untitled 19
SOURCE      synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE   1 (bases 1 to 2999)
TITLE     Direct Submission
http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..2999
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     enhancer        36..415
                     /note="CMV enhancer"
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        416..619
                     /note="CMV promoter"
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
                     promoter"
     promoter        664..682
                     /note="T7 promoter"
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     polyA_signal    829..1053
                     /note="bGH poly(A) signal"
                     /note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
     CDS             1226..2020
                     /codon_start=1
                     /gene="aph(3')-II (or nptII)"
                     /product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
                     /note="NeoR/KanR"
                     /note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
                     (Geneticin(R))"
                     /translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
                     VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
                     SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
                     GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
                     LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
     rep_origin      2346..2934
                     /direction=RIGHT
                     /note="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
                     replication"
ORIGIN
        1 gactcttcgc gatgtacggg ccagatatac gcgttgacat tgattattga ctagttatta
       61 atagtaatca attacggggt cattagttca tagcccatat atggagttcc gcgttacata
      121 acttacggta aatggcccgc ctggctgacc gcccaacgac ccccgcccat tgacgtcaat
      181 aatgacgtat gttcccatag taacgccaat agggactttc cattgacgtc aatgggtgga
      241 ctatttacgg taaactgccc acttggcagt acatcaagtg tatcatatgc caagtacgcc
      301 ccctattgac gtcaatgacg gtaaatggcc cgcctggcat tatgcccagt acatgacctt
      361 atgggacttt cctacttggc agtacatcta cgtattagtc atcgctatta ccatggtgat
      421 gcggttttgg cagtacatca atgggcgtgg atagcggttt gactcacggg gatttccaag
      481 tctccacccc attgacgtca atgggagttt gttttggcac caaaatcaac gggactttcc
      541 aaaatgtcgt aacaactccg ccccattgac gcaaatgggc ggtaggcgtg tacggtggga
      601 ggtctatata agcagagctc tctggctaac tagagaaccc actgcttact ggcttatcga
      661 aattaatacg actcactata gggagaccca agctggctag cgtttaaact taagcttggt
      721 accgagctcg gatccactag tccagtgtgg tggaattctg cagatatcca gcacagtggc
      781 ggccgctcga gtctagaggg cccgtttaaa cccgctgatc agcctcgact gtgccttcta
      841 gttgccagcc atctgttgtt tgcccctccc ccgtgccttc cttgaccctg gaaggtgcca
      901 ctcccactgt cctttcctaa taaaatgagg aaattgcatc gcattgtctg agtaggtgtc
      961 attctattct ggggggtggg gtggggcagg acagcaaggg ggaggattgg gaagacaata
     1021 gcaggcatgc tggggatgcg gtgggctcta tggcttctac tgggcggttt tatggacagc
     1081 aagcgaaccg gaattgccag ctggggcgcc ctctggtaag gttgggaagc cctgcaaagt
     1141 aaactggatg gctttctcgc cgccaaggat ctgatggcgc aggggatcaa gctctgatca
     1201 agagacagga tgaggatcgt ttcgcatgat tgaacaagat ggattgcacg caggttctcc
     1261 ggccgcttgg gtggagaggc tattcggcta tgactgggca caacagacaa tcggctgctc
     1321 tgatgccgcc gtgttccggc tgtcagcgca ggggcgcccg gttctttttg tcaagaccga
     1381 cctgtccggt gccctgaatg aactgcaaga cgaggcagcg cggctatcgt ggctggccac
     1441 gacgggcgtt ccttgcgcag ctgtgctcga cgttgtcact gaagcgggaa gggactggct
     1501 gctattgggc gaagtgccgg ggcaggatct cctgtcatct caccttgctc ctgccgagaa
     1561 agtatccatc atggctgatg caatgcggcg gctgcatacg cttgatccgg ctacctgccc
     1621 attcgaccac caagcgaaac atcgcatcga gcgagcacgt actcggatgg aagccggtct
     1681 tgtcgatcag gatgatctgg acgaagagca tcaggggctc gcgccagccg aactgttcgc
     1741 caggctcaag gcgagcatgc ccgacggcga ggatctcgtc gtgacccatg gcgatgcctg
     1801 cttgccgaat atcatggtgg aaaatggccg cttttctgga ttcatcgact gtggccggct
     1861 gggtgtggcg gaccgctatc aggacatagc gttggctacc cgtgatattg ctgaagagct
     1921 tggcggcgaa tgggctgacc gcttcctcgt gctttacggt atcgccgctc ccgattcgca
     1981 gcgcatcgcc ttctatcgcc ttcttgacga gttcttctga attattaacg cttacaattt
     2041 cctgatgcgg tattttctcc ttacgcatct gtgcggtatt tcacaccgca tacaggtggc
     2101 acttttcggg gaaatgtgcg cggaacccct atttgtttat ttttctaaat acattcaaat
     2161 atgtatccgc tcatgagaca ataaccctga taaatgcttc aataatagca cgtgctaaaa
     2221 cttcattttt aatttaaaag gatctaggtg aagatccttt ttgataatct catgaccaaa
     2281 atcccttaac gtgagttttc gttccactga gcgtcagacc ccgtagaaaa gatcaaagga
     2341 tcttcttgag atcctttttt tctgcgcgta atctgctgct tgcaaacaaa aaaaccaccg
     2401 ctaccagcgg tggtttgttt gccggatcaa gagctaccaa ctctttttcc gaaggtaact
     2461 ggcttcagca gagcgcagat accaaatact gtccttctag tgtagccgta gttaggccac
     2521 cacttcaaga actctgtagc accgcctaca tacctcgctc tgctaatcct gttaccagtg
     2581 gctgctgcca gtggcgataa gtcgtgtctt accgggttgg actcaagacg atagttaccg
     2641 gataaggcgc agcggtcggg ctgaacgggg ggttcgtgca cacagcccag cttggagcga
     2701 acgacctaca ccgaactgag atacctacag cgtgagctat gagaaagcgc cacgcttccc
     2761 gaagggagaa aggcggacag gtatccggta agcggcaggg tcggaacagg agagcgcacg
     2821 agggagcttc cagggggaaa cgcctggtat ctttatagtc ctgtcgggtt tcgccacctc
     2881 tgacttgagc gtcgattttt gtgatgctcg tcaggggggc ggagcctatg gaaaaacgcc
     2941 agcaacgcgg cctttttacg gttcctgggc ttttgctggc cttttgctca catgttctt
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片