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文献和实验
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保存条件 :-20
保质期 :2年
英文名 :pCAGGS-Myc
库存 :100
供应商 :上海烜雅生物科技有限公司
CAS号 :/
规格 :干粉/液体
基本信息名称:pCAGGS-Myc哺乳表达质粒
别称: pCAGGS-Myc
启动子: | CAG |
---|---|
复制子: | pUC |
终止子: | β-globin poly(A) signal |
质粒分类: | 哺乳细胞质粒;哺乳表达质粒;pCAG系列质粒 |
质粒大小: | 4809bp |
质粒标签: | N-Myc |
原核抗性: | Amp |
克隆菌株: | DH5a |
培养条件: | 37度 |
表达宿主: | 293T等哺乳细胞 |
质粒属性
载体宿主: | 哺乳细胞 |
---|---|
载体用途: | 蛋白表达 |
基因种属: | 空载体 |
基因类型: | ORF |
原核抗性: | Amp |
真核抗性: | |
荧光蛋白: |
质粒简介
pCAGGS-Myc质粒是一个哺乳细胞真核表达质粒,CAG启动子驱动Myc标签和目的基因融合表达。本质粒由武汉淼灵生物科技有限公司构建并分享至淼灵质粒平台。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4809 bp ds-DNA circular SYN 17-AUG-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS pCAGGS-Myc.dna
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4809)
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4809
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
regulatory 1..10
/regulatory_class="other"
/note="vertebrate consensus sequence for strong initiation
of translation (Kozak, 1987)"
CDS 10..39
/codon_start=1
/product="Myc (human c-Myc oncogene) epitope tag"
/label=Myc
/translation="EQKLISEEDL"
polyA_site 169..224
/label=-beta-globin poly(A) signal
/note="rabbit beta-globin polyadenylation signal"
promoter 757..952
/label=SV40 promoter
/note="SV40 early promoter"
rep_origin 803..938
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
polyA_signal 958..1092
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(1330..1918)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(2089..2949)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(2950..3054)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
enhancer 3085..3464
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 3466..3743
/label=chicken beta-actin promoter
intron 3744..4761
/label=chimeric intron
/note="chimera between introns from chicken beta-actin and
rabbit beta-globin"
ORIGIN
1 gccaccatgg aacaaaaact catctcagaa gaggatctgg aattcgagct catcgatggt
61 acccgggcat gcctcgagct agcagatctt aattaattaa ggatcttttt ccctctgcca
121 aaaattatgg ggacatcatg aagccccttg agcatctgac ttctggctaa taaaggaaat
181 ttattttcat tgcaatagtg tgttggaatt ttttgtgtct ctcactcgga aggacatatg
241 ggagggcaaa tcatttaaaa catcagaatg agtatttggt ttagagtttg gcaacatatg
301 cccatatgct ggctgccatg aacaaaggtt ggctataaag aggtcatcag tatatgaaac
361 agccccctgc tgtccattcc ttattccata gaaaagcctt gacttgaggt tagatttttt
421 ttatattttg ttttgtgtta tttttttctt taacatccct aaaattttcc ttacatgttt
481 tactagccag atttttcctc ctctcctgac tactcccagt catagctgtc cctcttctct
541 tatggagatc cctcgacctg cagcccaagc ttggcgtaat catggtcata gctgtttcct
601 gtgtgaaatt gttatccgct cacaattcca cacaacatac gagccggaag cataaagtgt
661 aaagcctggg tgcctaatga gtgagctaac tcacattaat tgcgttgcgc tcactgcccg
721 ctttccagtc gggaaacctg tcgtgccagc ggatccgcat ctcaattagt cagcaaccat
781 agtcccgccc ctaactccgc ccatcccgcc cctaactccg cccagttccg cccattctcc
841 gccccatggc tgactaattt tttttattta tgcagaggcc gaggccgcct cggcctctga
901 gctattccag aagtagtgag gaggcttttt tggaggccta ggcttttgca aaaagctaac
961 ttgtttattg cagcttataa tggttacaaa taaagcaata gcatcacaaa tttcacaaat
1021 aaagcatttt tttcactgca ttctagttgt ggtttgtcca aactcatcaa tgtatcttat
1081 catgtctgga tccgctgcat taatgaatcg gccaacgcgc ggggagaggc ggtttgcgta
1141 ttgggcgctc ttccgcttcc tcgctcactg actcgctgcg ctcggtcgtt cggctgcggc
1201 gagcggtatc agctcactca aaggcggtaa tacggttatc cacagaatca gggataacgc
1261 aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca aaaggccagg aaccgtaaaa aggccgcgtt
1321 gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag
1381 tcagaggtgg cgaaacccga caggactata aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc
1441 cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc
1501 ttcgggaagc gtggcgcttt ctcatagctc acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt
1561 cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt
1621 atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc
1681 agccactggt aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa
1741 gtggtggcct aactacggct acactagaag aacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa
1801 gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg
1861 tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga
1921 agatcctttg atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg
1981 gattttggtc atgagattat caaaaaggat cttcacctag atccttttaa attaaaaatg
2041 aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg tctgacagtt accaatgctt
2101 aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg tctatttcgt tcatccatag ttgcctgact
2161 ccccgtcgtg tagataacta cgatacggga gggcttacca tctggcccca gtgctgcaat
2221 gataccgcga gacccacgct caccggctcc agatttatca gcaataaacc agccagccgg
2281 aagggccgag cgcagaagtg gtcctgcaac tttatccgcc tccatccagt ctattaattg
2341 ttgccgggaa gctagagtaa gtagttcgcc agttaatagt ttgcgcaacg ttgttgccat
2401 tgctacaggc atcgtggtgt cacgctcgtc gtttggtatg gcttcattca gctccggttc
2461 ccaacgatca aggcgagtta catgatcccc catgttgtgc aaaaaagcgg ttagctcctt
2521 cggtcctccg atcgttgtca gaagtaagtt ggccgcagtg ttatcactca tggttatggc
2581 agcactgcat aattctctta ctgtcatgcc atccgtaaga tgcttttctg tgactggtga
2641 gtactcaacc aagtcattct gagaatagtg tatgcggcga ccgagttgct cttgcccggc
2701 gtcaatacgg gataataccg cgccacatag cagaacttta aaagtgctca tcattggaaa
2761 acgttcttcg gggcgaaaac tctcaaggat cttaccgctg ttgagatcca gttcgatgta
2821 acccactcgt gcacccaact gatcttcagc atcttttact ttcaccagcg tttctgggtg
2881 agcaaaaaca ggaaggcaaa atgccgcaaa aaagggaata agggcgacac ggaaatgttg
2941 aatactcata ctcttccttt ttcaatatta ttgaagcatt tatcagggtt attgtctcat
3001 gagcggatac atatttgaat gtatttagaa aaataaacaa ataggggttc cgcgcacatt
3061 tccccgaaaa gtgccacctg ggtcgacatt gattattgac tagttattaa tagtaatcaa
3121 ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg cgttacataa cttacggtaa
3181 atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg
3241 ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca atgggtggag tatttacggt
3301 aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg
3361 tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta catgacctta tgggactttc
3421 ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac catggtcgag gtgagcccca
3481 cgttctgctt cactctcccc atctcccccc cctccccacc cccaattttg tatttattta
3541 ttttttaatt attttgtgca gcgatggggg cggggggggg gggggggccc cccccaggcg
3601 gggcggggcg gggcgagggg cggggcgggg cgaggcggaa aggtgcggcg gcagccaatc
3661 agagcggcgc gctccgaaag tttcctttta tggcgaggcg gcggcggcgg cggccctata
3721 aaaagcgaag cgcgcggcgg gcgggagtcg ttgcgcgctg ccttcccccc gtgccccgct
3781 ccgccgccgc ctcgcgccgc ccgccccggc tctgactgac cgcgttactc ccacaggtga
3841 gcgggcggga cggcccttct cctccgggct gtaattagcg cttggtttaa tgacggcttg
3901 tttcttttct gtggctgcgt gaaagccttg aggggctccg ggagggccct ttgtgcgggg
3961 ggagcggctc ggggggtgcg tgcgtgtgtg tgtgcgtggg gagcgccgcg tgcggctccg
4021 cgctgcccgg cggctgtgag cgctgcgggc gcggcgcggg gctttgtgcg ctccgcagtg
4081 tgcgcgaggg gagcgcggcc gggggcggtg ccccgcggtg cggggggggc tgcgagggga
4141 acaaaggctg cgtgcggggt gtgtgcgtgg gggggtgagc agggggtgtg ggcgcgtcgg
4201 tcgggctgca accccccctg cacccccctc cccgagttgc tgagcacggc ccggcttcgg
4261 gtgcggggct ccgtacgggg cgtggcgcgg ggctcgccgt gccgggcggg gggtggcggc
4321 aggtgggggt gccgggcggg gcggggccgc ctcgggccgg ggagggctcg ggggaagggg
4381 cgcggcggcc cccggagcgc cggcggctgt cgaggcgcgg cgagccgcag ccattgcctt
4441 ttatggtaat cgtgcgagag ggcgcaggga cttcctttgt cccaaatctg tgcggagccg
4501 aaatctggga ggcgccgccg caccccctct agcgggcgcg gggcgaagcg gtgcggcgcc
4561 ggcaggaagg aaatgggcgg ggagggcctt cgtgcgtcgc cgcgccgccg tccccttctc
4621 cctctccagc ctcggggctg tccgcggggg gacggctgcc ttcggggggg acggggcagg
4681 gcggggttcg gcttctggcg tgtgaccggc ggctctagag cctctgctaa ccatgttcat
4741 gccttcttct ttttcctaca gctcctgggc aacgtgctgg ttattgtgct gtctcatcat
4801 tttggcaaa
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒;
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;(从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作)
③加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min;
④6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;(可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布,可以比传统涂布方法获得更多转化子)
⑤将平板正向培养1h,再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h;
(菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态,要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态)
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种(冰袋运输,存于-80℃,保质期90天,请务必划线挑单克隆培养)
四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏再四区划线,再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒(冰袋运输,存于-20℃,保质期90天)
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中,加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min,吸取5ul质粒转化,离心全涂。
二、转化图片
P3482/pENTR223-HMOX1(2点突变)人源基因质粒 |
P3483/pENTR223-HYLS1(1点突变)人源基因质粒 |
P3484/pENTR223-GLIPR1人源基因质粒 |
P3485/pENTR223-LACTB2(1点突变)人源基因质粒 |
P3486/pENTR223-C20orf144(1点突变)人源基因质粒 |
P3487/pENTR223-WBSCR28人源基因质粒 |
P3488/pENTR223-AQP5人源基因质粒 |
P3489/pENTR223-UNC50人源基因质粒 |
P3491/pENTR223-NSA2人源基因质粒 |
P3492/pENTR223-ECSIT人源基因质粒 |
P3493/pENTR223-TSPAN5人源基因质粒 |
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钻石会员
入驻年限:7年