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文献和实验
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保存条件 :-20
保质期 :2年
英文名 :Plasmid#83485
库存 :100
供应商 :上海烜雅生物科技有限公司
CAS号 :/
规格 :干粉/液体
基本信息名称:p2CT-His-MBP-Lbu_C2c2_R472A_H477A_R1048A_H1053A大肠敲除质粒
别称: Plasmid#83485
原核抗性: | Amp |
---|---|
克隆菌株: | Stbl3 |
培养条件: | 37度 |
质粒属性
载体宿主: | 大肠杆菌 |
---|---|
载体用途: | 基因敲除 |
基因种属: | |
基因类型: | |
原核抗性: | Amp |
真核抗性: | |
荧光蛋白: |
质粒简介
p2CT-His-MBP-Lbu_C2c2_R472A_H477A_R1048A_H1053A质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列:详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒;
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;(从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作)
③加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min;
④6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;(可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布,可以比传统涂布方法获得更多转化子)
⑤将平板正向培养1h,再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h;
(菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态,要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态)
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种(冰袋运输,存于-80℃,保质期90天,请务必划线挑单克隆培养)
四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏再四区划线,再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒(冰袋运输,存于-20℃,保质期90天)
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中,加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min,吸取5ul质粒转化,离心全涂。
二、转化图片
P1676/pLVML-3×FLAG-MCS-IRES-Puro慢病毒表达质粒 |
P2951/pLVML-3×HA-MCS-IRES-Puro慢病毒表达质粒 |
P2952/pLVML-Myc-MCS-IRES-Puro慢病毒表达质粒 |
P0247/pLVX-Puro慢病毒表达质粒 |
P0249/pLVX-IRES-Puro慢病毒表达质粒 |
P0250/pLVX-IRES-ZsGreen1慢病毒表达质粒 |
P0363/pLVX-IRES-Neo慢病毒表达质粒 |
P0424/pLVX-IRES-mCherry慢病毒表达质粒 |
P0729/pLVX-IRES-tdTomato慢病毒表达质粒 |
P0479/pLVX-EF1α-IRES-mCherry慢病毒表达质粒 |
P0405/pLVX-EF1α-IRES-puro慢病毒表达质粒 |
上海烜雅生物科技有限公司
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钻石会员
入驻年限:7年