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保存条件 :2-8度保存
保质期 :30天
英文名 :无
库存 :100ml/500ml
供应商 :继和生物
CAS号 :无
无菌脱纤维驴血/无菌脱纤维驴血/无菌脱纤维驴血的要求1.掌握一般培养基制备的原则和要求。
2.熟悉一般培养基制备的过程。
操作步骤
一、培养基的制备原则和要求
培养基是根据各类微生物生长繁殖的需要,用人工方法把多种物质混合而成的营养物。一般用来分离、培养菌类。常用的培养基有基础培养基、增菌培养基、选择培养基、鉴别培养基和厌氧培养基。在制备培养基时,应掌握如下原则和要求:
(一)培养基必须含有细菌生长繁殖所需要的营养物质。所用的化学药品必须纯净,称取的份量务必准确。
(二)培养基的酸碱度应符合细菌生长要求。按各种培养基要求准确测定调节pH值。多数细菌生长的适宜pH值为7.2~7.6,呈弱碱性。
(三)培养基的灭菌时间和温度,应按照各种培养基的规定进行,以保证灭菌效果及不损失培养基的必需营养成分。培养基经灭菌后,必须置37℃温箱中培养24小时,无菌方可应用。
(四)所用器皿须洁净,忌用铁或钢质器皿,要求没有抑制细菌生长的物质存在。
(五)制成的培养基应该是透明的,以便观察细菌生长性状以及其他代谢活动所产生的变化。
二、培养基制备过程
不同的培养基其制备方法也不同,一般包括以下步骤:
(一)准确称量 试剂 根据不同的菌类和用途,选择适宜的培养基,培养基所需 试剂 必须纯净。
(二)校正pH值 将称量好的培养基各种成分放入容器内,标记划线,加热溶解,补充水分,测定酸碱度,常用pH6.8~8.0的精密试纸或酸度计测定。用1N NaOH和1N HCl调节pH值到适宜范围内。
(三)过滤 将玻璃漏斗置铁架上,再用纱布夹棉花或用滤纸放在漏斗中,将上述培养基倒入其中过滤至透明。
(四)分装 将过滤后的培养基分装于中试管或三角瓶内(试管内每支装5mL;三角瓶中装100~150ml),塞好棉塞用牛皮纸包扎好,准备灭菌。
(五)灭菌 培养基的灭菌,常用高压蒸汽灭菌法。一般微 生物 的营养细胞在水中煮沸后即被杀死,但细菌的芽胞有较强的抗热性,须经高压蒸汽灭菌才能达到彻底灭菌的目的。根据蒸汽温度随压力升高而上升的原理,即压力越大,蒸汽温度就越高。因此,在同一温度条件下,采用高压蒸汽灭菌比干热灭菌法效果要好。而且在湿热情况下,菌体吸收水分后,其蛋白质易于凝固变性,因为蒸汽的穿透力强,杀菌效果好。
高压蒸汽灭菌,一般采用15磅/平方(即1.05kg/cm2)压力,此时的温度是121.3℃。灭菌20~30分钟后,可达到完全灭菌的目的。在进行灭菌的时候,首先要把灭菌锅内的冷空气排出,否则,冷空气存在会降低锅内的实际温度,影响灭菌效果。
三、基础培养基的制备
(一)牛肉浸液(肉水)
1.成分 新鲜牛肉 500g ,水1000 ml。
2.制法
(1)取新鲜牛肉,剔除肌膜、脂肪,切成小块,用绞肉机绞碎。
(2)按上述比例加水,浸泡过夜(夏天应将浸泡液放置在低温的地方,防止腐败;如果没有冷藏条件时,可省去浸泡过夜这一步),其间应搅拌数次。
(3)次日取上液煮沸一小时,并不断搅拌。
(4)补足蒸发的水分,用白布或绒布过滤后分装于三角瓶中,准备灭菌。
(5)置高压灭菌器内,15磅灭菌20~30分钟,置低温、暗处保存备用。无菌脱纤维驴血/无菌脱纤维驴血/无菌脱纤维驴血用途
用于制备各种培养基的基础液。
(二)肉浸液肉汤(普通肉汤)
1.成分 肉水 1000 ml ,蛋白胨 10g,氯化钠 5g,磷酸氢二钾 2g。
2.制法
(1)将以上成份加温溶于牛肉浸液中。
(2)调pH值为7.4~7.6。
(3)滤纸过滤后分装。
(4)15磅20~30分钟灭菌后备用。
3.用途 作一般细菌培养用。
(三)营养琼脂培养基(普通琼脂)
1.成分 肉水 1000ml,蛋白胨10g,磷酸氢二钾 lg ,氯化钠 5g,琼脂 20g。
2.制法
(1)将上述成分混合后,加热溶解,补足水份。
(2)校正pH值7.4~7.6。
(3)用纱布夹棉花过滤。
(4)分装于中 试管 或三角瓶中。
(5)高压灭菌20~30分钟后,将中 试管 摆成斜面,保存备用。
3.用途 一般细菌分离培养、菌种保存或用作特殊培养基。
(四)半固体培养基 基本上与营养 琼脂 的制备相同,仅将 琼脂 量减少至0.5~0.7%(1000 ml中加5~7g琼脂)即可。
(五)鲜血琼脂 将灭菌的营养琼脂加热溶化,冷却至45~50℃时,加入5~8%无菌脱纤鲜血(绵羊、黄牛、马和兔等),分装于 试管 后立即摆成斜面、或倾注于平皿中,待凝固后,置37℃培养1~2日。有污染者废弃;无菌者保存,置冰箱备用。
无菌脱纤维鲜血的制备:以无菌操作采取动物鲜血(绵羊、黄牛、马从颈静脉采血;兔则从心脏采血),放入带玻璃珠的无菌三角瓶内,摇动5~10分钟,放冰箱中备用。
红细胞(erythrocyte,red blood cell)直径7~8.5μm,呈双凹圆盘状,中央较薄(1.0μm),周缘较厚(2.0μm),故在血涂片标本中呈中央染色较浅、周缘较深(彩图5-2)。在扫描电镜下,可清楚地显示红细胞这种形态特点(图5-3)。红细胞的这种形态使它具有较大的表面积(约140μm 2 ),从而能最大限度地适应其功能携O 2 和CO 2 。新鲜单个红细胞为黄绿色,大量红细胞使血液呈猩红色,而且多个红细胞常叠连一起呈串钱状,称红细胞缗线。
图5-2 各种血细胞 1.2.3.单核细胞 4.5.6.淋巴细胞 7.8.9.10.11.中性粒细胞
12.13.14.嗜酸性粒细胞 15.嗜酸性粒细胞 16.红细胞 17.血小板.
图5-3 人红细胞扫描电镜像 ×4800
红细胞有一定的弹性和可塑性,细胞通过毛细血管时可改变形状。红细胞正常形态的保持需ATP供给能量,由于红细胞缺乏线粒体,ATP由无氧酵解产生;一量缺乏ATP供能,则导致细胞膜结构改变,细胞的形态也随之由圆盘状变为棘球状。这种形态改变一般是可逆的。可随着ATP的供能状态的改善而恢复。
成熟红细胞无细胞核,也无细胞器,胞质内充满血红蛋白(hemoglobin,Hb)。血红蛋白是含铁的蛋白质,约占红细胞重量的33%。它具有结合与运输O 2 和CO 2 的功能,当血液流经肺时,肺内的O 2 分压高,CO 2 分压低,血红蛋白即放出CO 2 而与O 2 结合;当血液流经其它器官的组织时,由于该处的CO 2 分压高而O 2 分压低,于是红细胞即放出O 2 并结合CO 2 。由于血红蛋白具有这种性质,所以红细胞能供给全身组织和细胞所需的O 2 ,带走所产生的部分CO 2 。
正常成人每微升血液中红细胞数的平均值,男性约400万~500万个,女性约350万~450万个。每100ml血液中血红蛋白含量,男性约12~15g,女性约10.5~13.5g。全身所有红细胞表面积总计,相当于人体表面积的2000倍 。红细胞的数目及血红蛋白的含量可有生理性改变,如婴儿高于成人,运动时多于安静状态,高原地区居民大都高于平原地区居民,红细胞的形态和数目的改变、以及血红蛋白的质和量的改变超出正常范围,则表现为病理现象。一般说,红细胞数少于300万/μ1,血红蛋白低于10g/100ml,则为 贫血 。此时常伴有红细胞的直径及形态的改变,如大红细胞贫血的红细胞平均直径>9μm,小红细胞贫血的红细胞平均直径<6μm。缺铁性贫血的红细胞,由于血红蛋白的含量明显降低,以致中央淡染区明显扩大。
无菌脱纤维驴血/无菌脱纤维驴血/无菌脱纤维驴血红细胞的渗透压与血浆相等,使出入红细胞的水分维持平衡。当血浆渗透压降低时,过量水分进入细胞,细胞膨胀成球形,甚至破裂,血红蛋白逸出,称为溶血(hemolysis);溶血后残留的红细胞膜囊称为血影(ghost)。反之,若血浆的渗透压升高,可使红细胞内的水分析出过多,致使红细胞皱缩。凡能损害红细胞的因素,如脂溶剂、蛇毒、溶血性细菌等均能引起溶血。
红细胞的细胞膜,除具有一般细胞膜的共性外,还有其特殊性,例如红细胞膜上有ABO血型抗原。
外周血中除大量成熟红细胞以外,还有少量未完全成熟的红细胞,称为网织红细胞(reticulocyte)在成人约为红细胞总数的0.5%~1.5%,新生儿较多,可达3%~6%。网织红细胞的直径略大于成熟红细胞,在常规染色的血涂片中不能与成熟红细胞区分。用煌焦蓝作体外活体染色,可见网织红细胞的胞质内有染成蓝色的细网或颗粒,它是细胞内残留的核糖体。核糖体的存在,表明网织红细胞仍有一些合成血红蛋白的功能。红细胞完全成熟时,核糖体消失,血红蛋白的含量即不再增加。贫血病人如果造血功能良好,其血液中网织红细胞的百分比值增高。因此,网织红细胞的计数有一定临床意义,它是贫血等某些血液病的诊断、疗效判断和估计预指标之一。
红细胞的平均寿命约120天。 衰老 的红细胞虽无形态上的特殊樗,但其机能活动和理化性质都有变化,如酶活性降低,血红蛋白变性,细胞膜脆性增大,以及表面电荷改变等,因而细胞与氧结合的能力降低且容易破碎。衰老的红细胞多在脾、骨髓和肝等处被巨噬细胞吞噬,同时由红骨髓生成和释放同等数量红细胞进入外周血液,维持红细胞数的相对恒定。
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