人正常前列腺基质永生化细胞WPMY-1

库存 ：1×10^6 细胞数

品系 ：见说明书

组织来源 ：细胞

物种来源 ：见说明书

细胞形态 ： 贴壁/悬浮

器官来源 ：见说明书

运输方式 ： 复苏或冻存运输

年限 ： P4代细胞

人正常前列腺基质永生化细胞WPMY-1操作详细步骤 

1.细胞复苏
1.1 离心法
1.1.1 准备一个 T25 的细胞培养瓶并做好标记，预热好的细胞完全培养基，一支 15ml
离心管，离心管中加入 4-5ml 细胞完全培养基。
1.1.2 取出细胞冻存管，在 37 度水浴中快速解冻，将管子擦干并消毒后迅速拿回生物安
全柜。
1.1.3 将细胞悬液转移到加有培养基的离心管中，1000 转离心 5 分钟。
1.1.4 倒掉上清，加入培养基轻轻重悬细胞亦可先将细胞团弹散后加入培养基混匀。
1.1.5 将重悬好的细胞转移到 T25 细胞培养瓶，补充培养基到 8ml 左右，十字摇晃，将
细胞铺匀后放入培养箱培养。
1.2 不离心法
1.2.1 准备一个 T25 的细胞培养瓶并做好标记，预热好的细胞完全培养基，培养瓶中加
入 8ml 左右培养基。
1.2.2 取出细胞冻存管，在 37 度水浴中快速解冻，将管子擦干并消毒后迅速拿回生物安
全柜。
1.2.3 将细胞悬液转移到加有培养基的培养瓶中，十字摇晃，将细胞铺匀后放入培养箱
培养，接种 16 小时后更换培养基。
2.人正常前列腺基质永生化细胞WPMY-1传代
2.1 准备细胞完全培养基，细胞培养瓶，胰酶（
0.25%Trypsin-0.53mM EDTA），DPBS。
2.2 弃上清，并加 2-3mlDPBS 轻柔冲洗培养瓶内细胞 1-2 次。
2.3 加入 1ml 胰酶，室温或者 37 度消化，直到细胞成片脱落，加入 3-4ml 完全培养基终
止消化，如果有成团块脱落的细胞可轻轻吹打分散细胞后再终止消化。（注意：消化时间与
所用胰酶效价，消化时候细胞密度以及温度等因素有关，建议第一次消化时候，多在显微
镜下观察，以找到最佳消化时间）
2.4 收集细胞悬液，1000 转离心 5 分钟，弃上清，加入培养基轻轻重悬细胞亦可先将细
胞团弹散后加入培养基混匀。
2.5 将重悬好的细胞按比例分装至 T25 细胞培养瓶，补充培养基到 8ml 左右，十字摇晃，
将细胞铺匀后放入培养箱培养。
3.人正常前列腺基质永生化细胞WPMY-1冻存
3.1 准备细胞冻存液，细胞冻存管，胰酶（
0.25%Trypsin-0.53mM EDTA），DPBS。
3.2 弃上清，并加 2-3mlDPBS 轻柔冲洗培养瓶内细胞 1-2 次。
3.3 加入 1ml 胰酶，室温或者 37 度消化，直到细胞成片脱落，加入完全培养基终止消
化，如果有成团块脱落的细胞可轻轻吹打分散细胞后再终止消化。
3.4 收集细胞悬液，1000 转离心 5 分钟，弃上清。
3.5 加入冻存液，重悬细胞，并分装到冻存管，冻存密度 0.8-1.5×106细胞/ml。
3.6 将冻存管放入程序降温盒，并放到-80℃冰箱，过夜后将冻存管转移到液氮保存。
4.人正常前列腺基质永生化细胞WPMY-1注意事项
4.1 建议收到细胞后先用我们配套的培养基和血清。收到活细胞的客户培养瓶中的培养
基可回收使用，保存在 4 度可使用一周。
4.2 不同实验室操作上会有些许差异，为了避免细胞不适应，请先按照说明书推荐的方
法和操作步骤培养，待细胞冻存后可根据自己的习惯操作看细胞是否能够适应。
4.3 建议收到细胞后，前几代及时冻存一些细胞，并最好是可以多冻存几个批次。