产品详情
文献和实验
相关推荐
保存条件 :-20
保质期 :2年
英文名 :H-YPT3
库存 :100
供应商 :上海烜雅生物科技有限公司
CAS号 :/
规格 :干粉/液体
基本信息名称:pEGFP-Rab11b-S25N人源基因质粒
别称: H-YPT3
启动子:CMV
复制子: pUC
质粒分类:基因文库质粒
原核抗性: Kan
筛选标记:G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主:哺乳细胞
载体用途:蛋白表达
基因种属:人
基因类型:ORF
原核抗性:Kan
真核抗性:Neo/G418
荧光蛋白:
质粒简介:详询
质粒图谱
质粒序列:详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒;
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;(从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作)
③加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min;
④6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;(可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布,可以比传统涂布方法获得更多转化子)
⑤将平板正向培养1h,再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h;
(菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态,要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态)
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种(冰袋运输,存于-80℃,保质期90天,请务必划线挑单克隆培养)
四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏再四区划线,再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒(冰袋运输,存于-20℃,保质期90天)
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中,加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min,吸取5ul质粒转化,离心全涂。
二、转化图片
P0970/pCMV6-ETV5-S248A-m小鼠基因质粒 |
P0971/pCMV6-ETV5-K263A-m小鼠基因质粒 |
P0956/pCMV6-ETV5-K293A-m小鼠基因质粒 |
P1014/pCMV6-ETV5-S367A-m小鼠基因质粒 |
P0953/pLV-CMV-wnt3a-m小鼠基因慢病毒质粒 |
P0954/pRC/PSV-m CBP-HA小鼠基因质粒 |
P1033/pCDNA3.1-GPR35-m小鼠基因质粒 |
P2234/pCDNA3.1-Zeo-GPR35-m小鼠基因质粒 |
P1089/pCDNA6-V5-His-CaV1.2-m小鼠基因质粒 |
P1126/pECMV-Socs3-m小鼠基因质粒 |
P2150/TetO-FUW-OSKM小鼠基因质粒 |
P1273/pLVML-ECMV-Socs3-m小鼠基因慢病毒质粒 |
上海烜雅生物科技有限公司
实名认证
钻石会员
入驻年限:7年