pHIS2酵母单杂交质粒

保存条件 ：负20度

保质期 ：3个月

库存 ：100

供应商 ：钦胜生物

规格 ：2UG

产品介绍

pHIS2酵母单杂交质粒

 

基本信息

 

启动子: TRP1 ,T7,T3

复制子: pUC ori，FI ori

质粒分类: 酵母系列，酵母单杂交载体

质粒大小: 7207bp

原核抗性: Kan

筛选标记: TRP1

克隆菌株: DH5α

培养条件: 37℃，有氧 LB

表达宿主: 酵母细胞

5'测序引物: M13F:TGTAAAACGACGGCCAGT

3'测序引物: 根据序列设计引物

 

质粒简介

    pHIS2 is a reporter vector that can be used in yeast one-hybrid assays to identify and characterizeDNA-binding proteins. The vector was specifically designed for use with the BD Matchmaker™ One-Hybrid Library Construction & Screening Kit (#K1617-1). It contains a HIS3 nutritional reporter gene,located downstream of a multiple cloning site (MCS) and the minimal promoter of the HIS3 locus(PminHIS3). Cis-acting DNA sequences, or DNA target elements, can be inserted into the MCS andused as baits to screen GAL4 AD/cDNA fusion libraries for proteins that interact with the targetsequence. A protein-DNA (or one-hybrid) interaction can be detected by performing the assay in ayeast strain such as Y187 that is auxotrophic for histidine. Positive one-hybrid interactions driveexpression of the HIS3 reporter gene, which enables the host cell to grow on histidine-deficientmedia.

 

质粒图谱

 

 

pHIS2酵母单杂交质粒使用说明：

    

     1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；

     2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；

     3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；

     4、42℃热激90s，再冰浴2min；

     5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；

     6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；

     7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；

     8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；

     9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。

 

pHIS2酵母单杂交质粒注意事项：

 

      1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。

      2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。