pLVX-EF1α-IRES-mCherry慢病毒表达质粒

保存条件 ：负20度

保质期 ：3个月

库存 ：100

供应商 ：钦胜生物

规格 ：2UG

产品介绍

pLVX-EF1α-IRES-mCherry慢病毒表达质粒

 

基本信息

 

启动子: EF-1α promoter

复制子: pUC ori

终止子: SV40 poly(A) signal

质粒分类: 病毒系列，慢病毒克隆载体

原核抗性: 氨苄青霉素Amp

筛选标记: 红色荧光

克隆菌株: 大肠杆菌Stbl3

培养条件: 37℃，有氧，LB

表达宿主: 哺乳细胞

诱导方式: 无须诱导，瞬时表达

5'测序引物: WPRE-R：CATAGCGTAAAAGGAGCAACA

3'测序引物: 根据序列设计引物

备注: 跟Clontech的序列有区别

 

质粒简介

    plvx-ef1α- IRES mCherry是双基因慢病毒表达载体，可用于几乎任何分裂或不分裂的转导哺乳动物细胞产生高滴度的慢病毒，包括原发性和干细胞。该载体包含一个内部核糖体进入位点（IRES）允许一个感兴趣的基因和红色荧光蛋白mCherry是同时从一个单一的mRNA转录表达。的转录表达的人延伸因子1α（EF1α）启动子驱动，继续甚至在载体稳定整合到宿主细胞的基因组被激活。稳定表达的转录允许各种细胞过程的监控（如原发性或干细胞分化）不与cmvpromoters转基因沉默。此外，矢量允许有效的流式细胞术检测稳定或瞬时转染的哺乳动物细胞表达的蛋白mCherry和利益，而无需耗时的药物和克隆选。.

 

 

质粒图谱

 

 

pLVX-EF1α-IRES-mCherry慢病毒表达质粒使用说明：

    

     1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；

     2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；

     3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；

     4、42℃热激90s，再冰浴2min；

     5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；

     6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；

     7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；

     8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；

     9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。

 

pLVX-EF1α-IRES-mCherry慢病毒表达质粒注意事项：

 

      1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。

      2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。