pRSETA大肠表达质粒

保存条件 ：负20度

保质期 ：3个月

库存 ：100

供应商 ：钦胜生物

规格 ：2UG

产品介绍

pRSETA大肠表达质粒

 

基本信息

 

别名: pRSET A

启动子: T7/lac

复制子: pUC ori，F1 ori

终止子: T7 terminator

质粒分类: 大肠杆菌载体；pRSET系列表达质粒

质粒大小: 2897bp

质粒标签: N-His，N-EK，N-Xpress

原核抗性: 氨苄青霉素Amp

克隆菌株: DH5α

培养条件: 37℃，有氧，LB

表达宿主: BL21(DE3)系列，推荐BL21Star（DE3)

培养条件: 37℃，有氧，LB

诱导方式: IPTG或乳糖及其类似物

5'测序引物: T7:TAATACGACTCACTATAGGG

3'测序引物: T7-ter:TGCTAGTTATTGCTCAGCGG

备注: pRSET表达质粒

 

质粒简介

pRSET A载体是从pUC的载体衍生而来，载体设计的目的是为了在大肠杆菌中高水平的表达和纯化目的克隆基因。载体上的T7启动子使得pRSETA载体高水平表达克隆的基因序列成为可能。此外，DNA插入片段的位于载体上面的下游侧，并能够上游的蛋白编码框相一致，上游的编码序列表达了一个N-端融合的肽。该序列包括一个ATG翻译起始密码子，一个6 X His标签，一个来源于噬菌体T7基因10的转录稳定序列，Xpress抗原表位，以及一个肠激酶裂解识别序列。His 标签允许简单的Ni柱蛋白纯化。肠激酶识别位点位于His标签和重组蛋白之间，可以随后方便的去除重组蛋白的N-端的融合肽。

 

质粒图谱

 

 

pRSETA大肠表达质粒使用说明：

    

     1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；

     2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；

     3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；

     4、42℃热激90s，再冰浴2min；

     5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；

     6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；

     7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；

     8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；

     9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。

 

pRSETA大肠表达质粒注意事项：

 

      1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。

      2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。