pET-11a大肠表达质粒

保存条件 ：负20度

保质期 ：3个月

库存 ：100

供应商 ：钦胜生物

规格 ：2UG

产品介绍

pET-11a大肠表达质粒

 

基本信息

 

启动子: T7/Lac

复制子: ColE1 ori

终止子: T7 terminator

质粒分类: 大肠系列质粒；大肠表达质粒；pET系列质粒

质粒大小: 5677bp

质粒标签: N-T7

原核抗性: 氨苄青霉素Amp（100μg/ml）

克隆菌株: DH5α等大肠杆菌

培养条件: 37℃，有氧，LB

表达宿主: BL21(DE3) 等大肠杆菌

培养条件: 37℃，有氧，LB

诱导方式: IPTG或乳糖及其类似物

5'测序引物: T7（TAATACGACTCACTATAGGG）

3'测序引物: T7-ter（TGCTAGTTATTGCTCAGCGG）

 

质粒简介

        pET11a-d系列的载体含有一个N端的T7标签和BamHI限制性内切酶位点。该系列载体是很多pET家族其他载体的来源质粒。pET21a-d系列载体对应于pET11a-d载体，但是包含有额外的其他载体特征。pET11a载体的单一的多克隆位点见上面的环状质粒图谱。注意：载体序列是以pBR322质粒的编码规矩进行编码的，所以T7蛋白表达区在质粒图谱上面是反向的。T7 RNA聚合酶启动的克隆和表达区域在质粒图谱中也被标注了出来。质粒的F1复制子是被定向的，所以在T7噬菌体聚合酶的作用下，包含有蛋白编码序列的病毒粒子能够产生，并启动蛋白表达，同时蛋白表达将被T7终止子序列的作用下终止蛋白翻译。

        pET-11a质粒是一种原核表达载体，含有一个N端的T7标签和BamHI限制性内切酶位点。表达由宿主细胞提供的T7 RNA聚合酶诱导，目的基因被克隆到质粒载体上，受噬菌体强转录及翻译信号控制。pET系统是有史以来在大肠杆菌中表达重组蛋白的功能最强大的系统，也是现今原核表达方面使用最广泛的系统。该系列质粒能很容易的通过降低诱导物的浓度来削弱蛋白表达。在非诱导条件下，可以使目的基因处于完全沉默状态而不转录。

 

质粒图谱
 

 

 

pET-11a大肠表达质粒使用说明：

    

     1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；

     2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；

     3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；

     4、42℃热激90s，再冰浴2min；

     5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；

     6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；

     7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；

     8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；

     9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。

 

pET-11a大肠表达质粒注意事项：

 

      1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。

      2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。