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文献和实验
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保存条件 :负20度
保质期 :3个月
库存 :100
供应商 :钦胜生物
规格 :2UG
产品介绍pLL3.7-Hsa-Let-7a-1miRNA人源基因调控质粒
基本信息
别名: pLL3.7-mU6-hsa-miR-let-7a-1
启动子: mouse U6 promoter
复制子: pUC ori,F1 ori,SV40 ori
终止子: WPRE
质粒分类: RNA文库质粒;RNA人源质粒;miRNA人源质粒
质粒大小: 8994bp
原核抗性: Amp(100μg/ml)
筛选标记: EGFP,Puro
克隆菌株: Stbl3
培养条件: 37℃,LB,有氧
表达宿主: 293T等哺乳细胞
培养条件: 37℃,5%CO2
诱导方式: 无需诱导
5'测序引物: mU6-F(CAGCACAAAAGGAAACTCACC)
3'测序引物: SV40-R(GGACTTTCCACACCTGGTTG)
质粒简介
pLL3.7-Hsa-Let-7a-1miRNA质粒是在pLL3.7载体上克隆了一段非编码核苷酸序列得到的一个哺乳细胞慢病毒miRNA(MicroRNA)表达质粒。mU6启动Hsa-Let-7a-1miRNA的转录。该质粒可作为普通过表达质粒直接转染哺乳细胞,其是第三代慢病毒载体,所以也可包装成慢病毒侵染细胞。质粒本身同时带有EGFP荧光标签和Puro抗性标记,可利用EGFP来检测转染效率,或可用流式细胞仪和嘌呤霉素筛选转染后的细胞得到阳性克隆。
质粒图谱
pLL3.7-Hsa-Let-7a-1miRNA人源基因调控质粒使用说明:
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;
3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;
4、42℃热激90s,再冰浴2min;
5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;
8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。
pLL3.7-Hsa-Let-7a-1miRNA人源基因调控质粒注意事项:
1、如果您收到的是甘油菌种,请先四区划线,挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多,请将质粒按比例稀释后再转化。
上海钦胜生物科技有限公司
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