FU-tet-o-hOct4人源基因质粒

保存条件 ：负20度

保质期 ：3个月

库存 ：100

供应商 ：钦胜生物

规格 ：2UG

产品介绍

FU-tet-o-hOct4人源基因质粒

  

基本信息

 

启动子: minimal CMV promoter

复制子: pUC ori,F1 ori,SV40 ori

终止子: WPRE

质粒分类: 基因文库质粒；人源基因质粒；人源真核质粒

质粒大小: 9471bp

原核抗性: Amp（100μg/ml）

筛选标记: Zeo

克隆菌株: Stbl3

培养条件: 37℃，LB，有氧

表达宿主: 293T等哺乳细胞

培养条件: 37℃，5%CO2

诱导方式: 四环素调控

5'测序引物: miniCMV-F（GCGTGTACGGTGGGAGGCC）

3'测序引物: WPRE-R（CATAGCGTAAAAGGAGCAACA）

 

质粒简介

             pFU-tet-o-hOct4质粒是一个人源Oct4基因的哺乳细胞慢病毒过表达质粒，minimal CMV promoter启动Oct4目的基因的表达。该质粒可作为过表达质粒直接转染哺乳细胞，也可包装成慢病毒侵染细胞。质粒本身带有Zeo筛选标记，可用博来霉素筛选转染后的细胞得到稳转细胞系。基因NCBI信息：Homo sapiens POU class 5 homeobox 1 (POU5F1), transcript variant 1, mRNA；NCBI Reference Sequence: NM_002701.5.

 

质粒图谱

 

 

FU-tet-o-hOct4人源基因质粒使用说明：

    

     1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；

     2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；

     3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；

     4、42℃热激90s，再冰浴2min；

     5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；

     6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；

     7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；

     8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；

     9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。

 

FU-tet-o-hOct4人源基因质粒注意事项：

 

      1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。

      2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。