骨组织脱钙（小）

提供商 ：晶莱生物

服务名称 ：骨组织脱钙（小）

规格 ：样本

病理实验制片过程中，我们经常会遇到含钙高的组织，因其组织结构质地太硬，组织中存有的钙盐会妨碍使用常规方法制作良好切片，经固定后，必须除去钙盐使组织软化，方能进行常规切片。

 

骨组织含钙量最多，所以脱钙是制作骨组织切片的重要环节，尤其需要进行免疫组化的骨组织。

 

为了达到骨组织既充分脱钙，又保护骨组织的抗原不受破坏，需对骨组织固定之后再脱钙或采用兼有固定与脱钙的试剂处理，然后才能常规制片。

 

一、骨脱钙方法

常见的脱钙方法主要有单纯酸类脱钙法、混合酸类脱钙法以及有机螯合剂法。

 

单纯酸类脱钙法：

主要有甲酸、硝酸、盐酸等，硝酸和甲酸应用最多。

①   甲酸是一种使用范围较广的脱钙剂，浓度一般10%，脱钙速度较慢，适合骨髓组织脱钙，不适合皮质骨的脱钙。

②   硝酸脱钙液缺点是形成亚硝酸而使溶液呈黄色，产生颜色即迅速影响脱钙速度，且组织的黄染会妨碍随后的染色，可在硝酸内加入0.1%尿素可以防止变黄而使之无色。

③   盐酸脱钙液易使组织收缩，作用速度较快，用氯化钠作为溶剂则效果良好。

 

混合酸类脱钙法：

两种酸类脱钙剂一起使用，或在单纯酸内加入另一种脱钙剂或少量的其它试剂所配制的脱钙液。

特点是脱钙完全，快速，防止纤维组织过度膨胀，减少组织破坏对染色结果的影响，通过加入不同的化学成分可以弥补单纯酸类脱钙剂的不足。

①   含甲酸脱钙液（甲酸-福尔马林液）

 

配方：甲酸                 5－25ml

        福尔马林            5ml

        蒸馏水     加至    100ml

5%的甲酸是良好的一种常规脱钙剂，速度适当，组织损害小。当甲酸成分增至25%则增快脱钙速度，加入甲醛可适当保护组织不受酸损害（注意：增加脱钙速度只能靠牺牲细胞微细构造来获得）。根据组织的厚度和钙化程度，5%甲酸在2至4天可以完全脱钙。

 

②   含盐酸脱钙液（Von Ebnei氏液）

配方：浓盐酸             15ml

氯化钠             7.5ml

蒸馏水    加至   100ml

 

③   含硝酸脱钙液

配方1：福尔马林              5ml

          硝酸（比重1.41）  7.5－15ml

          蒸馏水    加至       100ml

此配方中甲醛可以部分抑制硝酸的浸软作用，同时具有固定作用，硝酸脱钙迅速，组织不膨胀，掌握好可以直接脱水，不影响染色。不过最好先洗去硝酸。

 

配方2：硝酸（用0.1尿素稳定）   5－10ml

           蒸馏水           加至       100ml

此配方用作常规脱钙剂，作用迅速，对组织不膨胀，对细胞的保存和染色比前者更好，能适用于多种染色技术，但最好每日早晚更换一次新鲜溶液，一般1-3天完成。

 

④   螯合剂脱钙

EDTA（乙er胺四乙酸）是用于脱钙的螯合剂。为有机化合物，有结合某些金属的能力，能结合钙盐，15%的溶液即起脱钙作用，组织用此方法脱钙，对组织破坏性小，即放置数月亦不致引起对组织的破坏，对以后大多数的染色技术皆可得到满意结果。

 

 

二、骨脱钙步骤

1.取材：将骨组织固定于10%福尔马林24小时后再锯取厚度约0.5厘米骨片。

2.固定：再以10%福尔马林固定2天。

3.将组织置于脱钙剂中，每日更换新鲜液、直至组织软化为止。

4.流水冲洗24小时/2%亚硫酸钠水溶液中和，至少3小时，水洗至少1小时（除酸）。

5.进行常规脱水，透明，浸蜡，切片。

 

三、鉴定脱钙是否彻底

确定脱钙“终点”有以下三种方法：

1. 最常用的是最简单的方法――针刺，如果很容易被刺透，而且不感到阻力时，说明组织基本上脱钙完全，否则应继续脱钙。

靠组织的柔软性测验脱钙作用靠不住，而且这种插入一根针以察觉钙沉淀的方法会造成组织损伤。

 

2．用X射线检查：看组织内是否仍有钙质。
 

3．用化学实验检查：

取5ml脱钙液用2M的NaOH（氢氧Hua钠）调整至中性，再加5％草酸钠或草酸铵1ml，液体混浊表示有钙质。迟至5分钟仍不混浊表示脱钙液中不含有钙质。

组织中仍有钙质时，一定量的钙离子会溶于脱钙液中，游离的钙会干扰脱钙作用的完成。显然，应在每次试验时完全更换，在试验中必须经过2－3小时间隔让钙溶解。

 

四、优质脱钙剂的标准

（a）完全脱钙；

（b）不损伤组织细胞或纤维；

（c）不妨碍以后的染色技术；

（d）适当的脱钙速度。

晶莱生物服务流程


晶莱生物实验服务项目

动物实验	细胞生物学	病理实验
消化系统模型	细胞培养	病理染色
胃酸分泌模型	普通细胞株	HE染色
脓毒症模型	细胞缺氧培养	油红O染色
胃溃疡模型	细胞培养+支架	番红固绿染色
胰腺炎模型	干细胞培养	Masson染色
肝纤维化模型	原代细胞分离/提取/培养	天狼猩红染色
DIO肥胖模型	细胞转染/病毒感染	PAS糖原染色
胆结石模型	Trans well共培养	阿利新蓝染色
结肠炎(UC)模型	细胞增殖	甲苯胺蓝染色
脂肪肝模型	细胞计数	尼氏染色
急性肝损伤模型	生长曲线测定	LFB髓鞘染色
免疫、代谢系统疾病模型	存活曲线测定	普鲁士蓝染色
骨质疏松模型	ccK-8增殖检测	VG染色
糖尿病模型	MTT增殖检测	EVG染色
高尿酸血症模型	CFSE检测增殖-流式检测	VonKossa染色
呼吸系统模型	BrDU检测-免疫荧光法	刚果红染色
肺纤维化模型	细胞凋亡	苏丹黑B染色
慢性肺阻塞模型	Annexin V/PI流式检测细胞凋亡	Trap染色
急性肺损伤模型	WB检测凋亡相关蛋白	抗酸染色
哮喘模型	透射电镜观察凋亡小体	革兰氏染色
肺栓塞模型	Tunel染色(POD法,DAB显色)	AB-PAS染色
支气管炎模型	Tunel(荧光法,含试剂盒)	亚甲基蓝染色
泌尿生殖系统模型	DNA ladder法	苯胺蓝染色
慢性肾衰模型	细胞周期	荧光 DAPI染色
急性肾衰模型	细胞显微计数	普鲁士蓝染色
肾间质纤维化模型	PI染色	间苯二酚碱性品红染色
肾结石模型	BrdU渗入法	银染
肾炎模型	免疫荧光染色	黑色素染色
子宫内膜异位症模型	PI流式检测细胞周期	镀银染色
心血管系统模型	细胞运动	PASM 六胺银染色
冠心病模型	Transwell检测细胞迁移	VG染色
心肌梗死模型	Transwell检测细胞侵袭	富尔根染色
心脏骤停模型	细胞划痕	亚甲基蓝染色
慢性心力衰竭模型	细胞克隆	碘-碘化钾染色
动脉粥样硬化模型	集落形成法/稀释铺板方法	Goldner三色法染色
白血病模型	软琼脂克隆法	PAS-萘酚磺S染色
高血压模型	毛细管克隆法	改良苯酚品红染色
神经系统模型	体外实验血管生成	网状纤维染色
脑卒中模型	磁珠分选细胞	β-半乳糖苷酶染色
栓塞性脑梗死模型	流式分选细胞	镀银染色
脑出血模型	开机费	movat五色染色
脑损伤模型	单色	维多利亚蓝染色
脊髓损伤模型	双色	免疫组化
帕金森模型	CBA多细胞因子流式检测	免疫组化预式
老年痴呆模型	组织/血液细胞制备	免疫组化正式
应激模型	组织单细胞制备	免疫荧光（石蜡-单标）
骨骼疾病模型	中性粒细胞提取	免疫荧光（石蜡-双标）
骨折模型	其他样本细胞制备（如血液等）	免疫荧光（石蜡-三标）
骨缺损模型	外周血PBMC分离	免疫荧光（冰冻-单标）
风湿免疫性关节炎模型	线粒体组学	免疫荧光（冰冻-双标）
骨关节炎模型	线粒体膜电位检测-流式法	制片前处理
五官疾病模型	线粒体膜电位检测-免疫荧光法	石蜡组织包埋
眼科疾病模型	线粒体ROS生物含量检测--流式	特殊包埋（细胞、材料、眼球等）
鼻腔疾病模型	线粒体ROS生物含量检测--免疫荧光	软化（肝硬化、皮肤结痂、植物等）
皮肤疾病模型	线粒体通透性转换孔（mPTP）	骨组织脱钙（小）
皮肤损伤模型	溶酶体免疫荧光法	骨组织脱钙（大）
肿瘤疾病模型	线粒体+溶酶体共定位	骨组织EDTA脱钙（小）
原位瘤模型	内质网	骨组织EDTA脱钙（大）
转移瘤模型	线粒体钙瞬时变化检测-流式	石蜡白片
皮下植瘤模型	ATP检测	细胞爬片
	ADP检测
	AMP检测
流式	DNA/RNA半定量检测	基因编辑工具
组织细胞悬液处理	pcr检测mRNA	合成（3保1）片段/质粒/引物合成
细胞处理	microRNA检测	质粒载体构建
血液标本处理	LncRNA表达量的检测	过表达腺病毒载体构建包装
细胞刺激培养	CirRNA表达量的检测	shRNA腺病毒载体构建包装
单色检测	凝胶电泳	过表达慢病毒载体构建包装
双色检测	基因合成	shRNA慢病毒载体构建包装
Annexin V/PI凋亡	＜300	过表达腺相关病毒载体构建包装
细胞周期	300-1,500	shRNA腺病毒载体构建包装
	1500 - 5000	稳转细胞株
	>5000
	特殊序列
ELISA	WB	qPCR
组织匀浆处理	蛋白提取及定量一	RNA抽提
ELISA（不含试剂盒）48T/kit	WB检测一（10孔膜/指标）	mRNA引物设计及合成
ELISA（不含试剂盒）96T/kit	灰度值分析及作图一（10孔膜/指标）	miRNA引物设计及合成
ELISA（含国产试剂盒）48T/kit	蛋白提取及定量二	LncRNA引物设计及合成
ELISA（含国产试剂盒）96T/kit	WB检测二（15孔膜/指标）	CircRNA引物设计及合成
	灰度值分析及作图二（15孔膜/指标）	mRNA RT-qPCR
		miRNA RT-qPCR
		LncRNA RT-qPCR
		CircRNA RT-qPCR

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