小鼠抗猪乙脑病毒抗体检测试剂盒

库存 ：99

供应商 ：泉州市睿信生物科技有限公司

检测方法 ：酶联免疫法

应用 ：科研使用

适应物种 ：多物种

样本 ：血清、血浆、组织等

规格 ：96T/48T

区别 一步法ELISA 两步法ELISA 三步法ELISA操作区别 加样品和标准品，加HRP标记抗体，37℃反应60分钟 加样品和标准品，加生物素标记抗体，37℃反应120分钟（第一次反应） 加样品和标准品，37℃反应90分钟（第一次反应） 加生物素标记抗体，37℃反应60分钟（第二次反应） 1×洗涤缓冲液5次（第一次洗涤） 1×洗涤缓冲液5次（第一次洗涤） 加亲和素标记HRP，37℃反应45分钟（第二次反应） 加亲和素标记HRP，37℃反应30分钟（第三次反应） 1×洗涤缓冲液5次（一次洗涤） 1×洗涤缓冲液5次（第二次洗涤） 1×洗涤缓冲液5次（第二次洗涤） TMB显色液反应15-25分钟 TMB显色液反应15-25分钟 TMB显色液反应15-25分钟 加入TMB显色终止液，读数 加入TMB显色终止液，读数 加入TMB显色终止液，读数总操作时长 实验总时常≈1.5h 实验总时常≈3h 实验总时常≈3.5h优点 1：减少反复孵育和洗板，实现代测样本和标记抗体同时孵育，仅需一次洗板。2：简化实验步骤，缩短实验时间。3：样本用量由100ul缩小为50ul。 1：适用于大部分ELISA夹心法项目，能够更好的降低背景值；2：能够放大实验结果反应性变化，增强实验的敏感性。 1：适用于大部分ELISA夹心法项目，能够更好的降低背景值；2：能够放大实验结果反应性变化，增强实验的敏感性。缺点 对抗体配对有一定要求，并不适用于所有的ELISA夹心法项目，筛选抗体对比较繁琐。 操作步骤复杂，并且操作时间比较长，而且实验中的样本用量会较大 操作步骤复杂，并且操作时间比较长，而且实验中的样本用量会较大一、夹心法根据操作步骤又分为一步法、两步法、三步法，三者之间的区别归纳如下：二、ELISA竞争法和夹心法的区别：竞争法（competitive ELISA）：小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的位点，因此不能用双抗体夹心法进行测定，可以采用竞争法模式。其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合。标本中抗原量含量愈多，结合在固相上的酶标抗原愈少，最后的显色也愈浅。优点：适用于小分子抗原，数据再现性很高。缺点：整体的敏感性和特异性都较差。传统两步法示意图： 睿信®一步法示意图： 夹心法（sandwich ELISA）：被检测的抗原包被在两个抗体之间，其中一个抗体将抗原固定于固相载体上，即捕捉抗体。另一个则是检测抗体，此抗体可用酶标记后直接测定抗原的量；或不标记，再透过酶标记的二级抗体来测定抗原的量。这两种抗体必须小心选取，才可避免交互反应或竞争相同的抗原结合部位。优点：高灵敏、高特异性，抗原无须事先纯化。缺点：抗原一定得拥有两个以上的抗体结合部位。竞争法示意图：竞争法和夹心法的相同点：两种方法都是检测抗原物质。 不同点：竞争法是用于检测小分子抗原物质，只有一个反应位点，没法用夹心法方法检测。而大分子抗原更适用于夹心法（也可以用竞争法），因为夹心法实验结果特异性和灵敏度更好。注意：不同物质的适用原理可能不同，所以并没有说竞争法的一定比夹心法做的结果好，同样夹心法的也不一定比竞争法的结果好。我根据不同项目推荐最佳适用方法的盒子。三：即用型标准品（稀释好的液体标准品）和高浓度单试剂标准品（粉剂标准品）的优劣势即用型：优势：使用更加方便，拆开即用不需要再另外稀释，使用线性会更好劣势：保存时间比较短，稳定性容易受保存条件和时间的影响粉剂标准品：优势：保存时间更长，试剂稳定性更好，可根据需求配置自己的需要的标准浓度劣势：需要自己稀释线性浓度，操作比较麻烦，稀释线性容易出现问题