拮抗法
实验原理
实验材料
试剂/试剂盒
实验步骤
二、标本制作：
取体重2 kg左右家兔，雌雄不拘，击昏后开胸剪取胸主动脉，立即置入通有95%O2和5%CO2混合气体的Kerb’s溶液中。仔细除去血管周围结缔组织，套在细棒上，剪成25×3 cm的螺旋条，两端分别结扎并留置一段线头。将标本放入盛有10 ml Kreb’s溶液的浴槽中（pH7.3～7.4，37 ℃通入混合气体1～2 个气泡/秒）。一端固定于标本板小钩上，另一端与张力传感器相连。负荷4 g，平衡1 h，其间每15分钟换一次营养液。
给药：按以下顺序向浴槽内加入去甲肾上腺素（NA）。
注：前次给药后如无反应或出现收缩达最大效应时给下一剂量。当给下一剂量后收缩反应不再增加时，冲洗标本，直至回复到基线后加入α-受体阻断剂酚妥拉明（phentolamine，Regintin），给药量为10-5 mol/L 0.03 ml，即浴槽浓度3×10-8 mol/l，15 min后重复上述给药步骤。
绘制量效曲线：
以对照曲线的最大反应为100%，分别求出给phentolamine 前后NA 各剂量的反应百分率。以phentolamine克分子浓度的负对数为横座标，反应百分率为纵座标在坐标纸上绘出量效曲线。
pA2值计算：
据公式： pA2=PAx＋log（Ab/A—1）
式中： Pax：竞争性拮抗剂克分子浓度负对数。
Ab：竞争性拮抗剂存在时，激动剂引起50%反应的剂量（ED50’）
A：无拮抗剂时，激动剂引起50%反应所需剂量（ED50）
将各所得数据代入公式即得pA2值。
注意事项
2. 爱惜传感器，操作动作要轻；
3. 加药应及时，准确。
