1.  称取牛肉膏3 g，蛋白胨10 g，氯化钠5 g 加入1 000 ml 蒸馏水中，加热溶化。
 

2.  待冷至40－50℃时，测定并矫正酸碱度为pH7.6。通常未矫正前的肉膏汤均呈酸性，故常用1/10 M NaOH 溶液进行矫正。
 

3.  酸碱度调整后，煮沸3－5 分钟，补足因蒸发失去的水量，待冷却后用滤纸使之过滤澄清。并重新测定酸碱度一次，若变动较大，应再进行矫正。
 

4.  按应用时的需要量分装于适当的试管或烧瓶内，塞上硅胶塞并用牛皮纸包扎，置高压蒸汽灭菌器内，经103.4 kpa、121.3℃、20 分钟灭菌。
 

5.  灭菌后取出培养基，待冷至40℃以下时，放入37℃温箱24 小时做无菌试验，如无菌生长，即可备用。