热激法
实验原理
实验材料
实验步骤
2. 取出3管制备好的感受态细胞，放在冰上融化；
3. 每100 ul感受态细胞加入约20 ng质粒DNA，3管分别加连接产物、标准超螺旋质粒DNA（阳性对照）及不加入任何DNA（阴性对照），用移液器轻轻吸打均匀，在冰上放置30分钟；
4. 热击：将离心管放置42 ℃水浴，热击90秒，注意：勿摇动离心管；
5. 冰镇：快速将离心管转移至冰浴，放置1－2分钟；
6. SOC培养基，在37 ℃摇床温和摇动温育45分钟，使细菌复苏；复苏：每管加400 ul
7. 布皿：取适当体积均匀涂布于含有IPTG、X-gal、抗生素（Amp）的LA平板；
8. 培养：倒置培养皿，于37 ℃培养12－16小时 即可观察到蓝白相间的菌落（其中白色菌落为含有外源插入片段的转化子，蓝色菌落是载体自连的转化子）
注意事项
1、利用氨苄青霉素抗性筛选转化子时，用转化细胞铺平板的密度要低（90mm平板上不得超过105个菌落），同时37℃培养不应超过20小时，具氨苄青霉素抗性的转化体可将－内酰胺酶分泌到培养基中，迅速灭活菌落周围的抗生素，从而导致对氨苄青霉素敏感的卫星菌落的出现。
2、 鉴定转化子中是否含有外源DNA片段常用的方法有：
1) 互补；
2) 杂交筛选；
3) 插入失活（一些老质粒如pBR322等）;
4) 小量提取质粒酶切检测、PCR检测
