实验方法

聚合酶链式反应（PCR）实验

难度系数: 暂无得分

PCR是一种选择性体外扩增DNA或RNA片段的方法。其特异性是由两个人工合成的引物序列决定的。所谓引物就是与待扩增DNA片段两翼互补的寡聚核苷酸，其本质是ssDNA片段。待扩增DNA模版加热变性后，两引物分别与两条DNA的两翼序列特异复性。此时，两引物的3'端相对，5'向背。在合适的条件下，由Taq DNA聚合酶催化引物引导的DNA合成，既引物的延伸。上述过程是由温度控制。这种热变性-复性-延伸的过程就是一个PCR循环。PCR就是在合适条件下的这种循环的不断重复。理论上扩增产物量成指数上升，既n个循环后，产量为2n拷贝。

PCR

实验原理

实验材料

DNA

试剂/试剂盒

MgCl2 DNA聚合酶 Buffer dNTP

仪器/耗材

毛细管薄壁离心管 PCR扩增仪琼脂糖电泳

实验步骤

1、反应体系：

（反应溶液可置于毛细管或薄壁离心管中扩增）

2、操作过程：（所用仪器为AMP1605热循环PCR扩增仪

预变性：94 ℃ 90秒

循环过程：94 ℃ 1秒 48 ℃ 1秒 72 ℃ 40秒 40个循环

延伸：72 ℃ 5分钟

3、检测：琼脂糖电泳检测。

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