一、激素的分装、配制

激素厂家生产的超排用生殖激素，如孕马血清促性腺激素、人绒毛膜促性腺激素等。用于小鼠超排时，其包装剂量较大，一般不会一次用完。而由于这些激素的化学特性，一旦经过稀释，在溶液中的生物学活性会很快下降并失活，大剂量稀释后即使不用也不能保存多久。所以，在使用前应将市售包装进行分装。分装时，需要自行称量一个包装的激素净重，按照净重与该包装标示的激素单位，换算出每单位重量的激素单位数。然后根据每次超排需要使用激素的单位数，用精密电子天平对激素进行称重、分装，装入灭菌的干燥青霉素瓶中，用胶布密封每个小包装，并用记号笔标记日期、重量及激素单位数，放入4 ℃冰箱待用。临用前，取出一个小包装，按照每只小鼠腹腔注射0.2 mL(或0.5 mL)的溶液量，用溶剂(一般用灭菌生理盐水)进行稀释。

二、小鼠超排处理日程安排与超排处理
 

于实验开始的当天（0天）下午3:00～5:00，选择阴门淡粉红色的雌性青年小鼠，这时小鼠正处于临近发情开始前，进行超排处理效果较好。抓住小鼠后，腹腔注射PMSG 8～10单位。于注射PMSG后的48～50小时，再给每只超排鼠腹腔注射hCG 8～10单位，注射hCG 15~17小时，从输卵管壶腹部回收卵丘－卵母细胞复合体。

三、小鼠卵母细胞采集及结构观察

颈椎脱臼法处死实验小鼠，用70％的酒精棉球消毒腹部。在下腹部中间剪开一个小口(图4-2A)，两只手或用镊子分别抓起切口的上下部皮肤向头部和尾部牵拉，直到充分暴露腹部(图4-2B)。切开腹膜，将内脏向上翻，即暴露两侧卵巢和输卵管(图4-2C)。用眼科镊子夹住子宫与输卵管联结处，用锋利的剪刀剪开输卵管系膜(图4-3A)，之后先剪断卵巢和输卵管之间的联系结构(图4-3B)，再剪断子宫与输卵管联结处，即得到输卵管部分，将输卵管转移到盛有PBS的表面皿中。

用眼科剪尽量除去输卵管上的脂肪，并冲洗干净，以免血液或脂肪球混入液体妨碍检卵。由于小鼠输卵管非常细，不容易直接冲洗管腔。将表面皿置于实体显微镜载物台上，在20或40倍镜下找到输卵管膨大部（壶腹部）(图4-4)，用一支眼科异物针固定输卵管，用另一支异物针撕开壶腹部，一般情况下，卵丘-卵母细胞团会自动移出。初学者对输卵管膨大部判断不准时，可用异物针纵向撕开整个输卵管。此时，卵母细胞周围包裹卵丘细胞，多个卵聚集成积云状。将卵母细胞团移到含透明质酸酶的液体中，卵母细胞就会分散成单个细胞。用较细的吸管检出卵母细胞到检卵杯中，用PBS洗3次，在实体显微镜下观察卵母细胞的形态结构。

卵母细胞通常为圆球形。小鼠卵母细胞较小，直径为70~90um左右，由透明带包围卵胞质构成。透明带外有放射冠，是由具有胞质突起的呈放射状排列的细胞(卵丘细胞)构成的。MII期卵母细胞成熟的标志是第一极体排出，小鼠卵母细胞的第一极体较大，容易辨认。