实验方法

细胞显微摄影实验

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显微摄影是通过显微镜来拍摄的方法。在动植物检疫工作上是科学研究、经验交流、仲裁谈判不可缺少的手段之一。要取得良好的显微摄影效果,最重要的是要有良好的显微镜设备和良好的显微镜操作技术。

基本方案

实验原理

生物显微摄影(Microphotography)是利用摄影装置来拍摄显微镜视野中所观察到的物像。在生物医学方面,主要用于对正常细胞或病变细胞的显微形态学研究记录。

实验材料

人类染色体标本

试剂/试剂盒

显影液 停影剂 定影液

实验步骤

一、拍摄前准备

1.  光路合轴  使光轴与光束处于同一轴线上。

2.  柯勒氏照明  使观察的视野获碍均匀而又充分的照明;防止杂散光对照相系统产生影响;使被摄物体不受热,影象清晰。

3.  物镜与目镜合理组合  依标本的不同和显微摄影要求,物镜与目镜的组合有一定规范,如:拍摄人类染色体影像,采用高分辨率的100倍油镜,配合10倍目镜,可获得良好分辨的理想放大影像。

4.  调整视场光阑和孔径光阑   使两者与所用物镜的数值孔径(N.A.镜口率)相等,所得的分辨力最高;视场光阑一旦调好,不要再动,而孔径光阑可随物镜数值孔径的更换,做相应的调整。

5.  一般来说,把孔径光阑的大小调成等于相应该物镜孔径像的2/3为宜,尽管丧失了少许的分辨力,却能提高影像的反差、焦点深度和清晰度。

6.  总之,上述作法是调整显微镜至最佳状态。

二、拍摄程序

1.  开启相机后盖,安装胶卷于照相机内。

2.  打开显微镜照明装置的电源开关,将亮度调至适当。

3.  依个人的视力,调整摄影目镜调焦环至井字线清晰。

4.  放一片需要拍摄的标本载玻片于载物台上。在低倍镜下选好要拍摄的核型或细胞结构,再转换到油镜下,聚焦标本细节,准备拍照。

5.  按下曝光按钮,曝光按钮亮表示曝光开始进行,熄灭表示曝光完毕。
 
三、黑白胶片的冲印

1.  冲印的操作步骤

(1)把胶片装入显影罐中(切勿粘在一起)先用清水冲洗,排除气泡.然后再把水倒掉,这有利于显影液的快速均一作用。

(2)从顶部罐口注入预先配好的约250 ml D-72式显影液。20℃显影4~12分钟。

(3)显影中轻轻摇影罐,使胶片表面充分受显影液作用,显影完毕,迅速倒出显影液。

(4)立即注入250 ml 预先配好的SB-I式停影液,停显时间为10秒,倒出停影液,随之加入250 ml 的F-5式酸性坚膜定影液,20℃定影15分钟。取出胶片流水冲洗30分钟以上。

(5)将胶片挂起,用脱脂棉轻轻吸掉胶片表面过多的积水,晾干。

(6)晾干后用放大机的胶片夹子夹住胶片,药膜面朝下,聚焦取景,然后在红灯条件下,用压纸板压住所需号放大像纸,药膜面向上。进行曝光(适当的曝光时间要经试验后决定)。

(7)曝光后的像纸,浸入D-72显影液中,然后用竹镊子不时地夹住像纸翻动,直到显影适度为止。

(8)显影合适后立即移到SB-I式停影液中,漂洗10~20秒,再浸入定影液中处理15分钟,取出在流水中冲洗60分钟左右。

(9)水洗后,放在电热上光机上烘干;裁边,装入有说明的纸袋内保存。

经验交流

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