IL-8生物学活性检测
实验原理
一、IL-8的诱生
1. 常规分离PBMC，洗涤后，调细胞浓度为5×106/ml。
2. 将细胞接种于24孔细胞培养板，每孔0.5 ml。
3. 加诱生剂LPS（20 ug/ml），每孔0.5 ml，37度，5%CO2孵育48 h。
4. 离心收集细胞培养上清液，用HCl溶液调为酸性（pH4.0），经SephadxG-75柱分离，收集活性组分即为待测的IL-8粗品。
二、IL-8的生物活性检测
1. 琼脂板的制备；取溶化后50度左右保温的2%琼脂糖与等体积50度水浴预温的DMEM培养液（2×浓缩），混合，取3 ml 加到洁净的载玻片上，铺成薄层，室温凝固后，放4℃，进一步凝固30~60分钟，红打孔器打孔。
2. 中性粒细胞制备：常规分离人外周血中性粒细胞。
3. 加样：取10 ul 中性粒细胞悬液加入琼脂板各组中心孔，分别取10 ul 待检样品及阳性对照品加入样品孔，取10 ul DMEM培养液加入对照孔；将玻片置于湿盒内，37℃温育2小时。
4. 染色：用甲醇溶液固定30分钟，用瑞氏染液染片并干燥。
5. 检测：显微镜下分别测量细胞从中心孔向样品孔游走的距离（趋化游走距离）及向阳性对照孔的游走距离（自发游走距离），趋化活性以趋化指数表示。
6. 趋化指数=趋化游走距离/自发游走距离
实验材料
实验步骤
一、IL-8的诱生
1. 常规分离PBMC，洗涤后，调细胞浓度为5×106/ml。
2. 将细胞接种于24孔细胞培养板，每孔0.5 ml。
3. 加诱生剂LPS（20 ug/ml），每孔0.5 ml，37度，5%CO2孵育48 h。
4. 离心收集细胞培养上清液，用HCl溶液调为酸性（pH4.0），经SephadxG-75柱分离，收集活性组分即为待测的IL-8粗品。
二、IL-8的生物活性检测
1. 琼脂板的制备；取溶化后50度左右保温的2%琼脂糖与等体积50度水浴预温的DMEM培养液（2×浓缩），混合，取3 ml 加到洁净的载玻片上，铺成薄层，室温凝固后，放4℃，进一步凝固30~60分钟，红打孔器打孔。
2. 中性粒细胞制备：常规分离人外周血中性粒细胞。
3. 加样：取10 ul 中性粒细胞悬液加入琼脂板各组中心孔，分别取10 ul 待检样品及阳性对照品加入样品孔，取10 ul DMEM培养液加入对照孔；将玻片置于湿盒内，37℃温育2小时。
4. 染色：用甲醇溶液固定30分钟，用瑞氏染液染片并干燥。
5. 检测：显微镜下分别测量细胞从中心孔向样品孔游走的距离（趋化游走距离）及向阳性对照孔的游走距离（自发游走距离），趋化活性以趋化指数表示。
6. 趋化指数=趋化游走距离/自发游走距离
注意事项
为确认待检样品中IL-8的特异性趋化效应，最好同时比较抗IL-8抗体与待测样品作用后的趋化结果。
