1.  小鼠巨噬细胞产生IL-1的诱导

（1）常规收集小鼠腹腔巨噬细胞，10%FCS-IMDM培养液悬浮细胞2×10⁶/ml，接种于24孔培养板，0.5 ml/well。

（2）每孔加20 ug/ml LPS 0.15 ml，37度，5%CO2孵育36~48小时。

 

（3）此时培养上清内含巨噬细胞分泌的高水平IL-1，收集培养上清，12000 r/min 离心15分钟，将上清移入新的1.5 ml 试管中，-20℃冻存。

 

2.  IL-1的生物学活性测定

（1）胸腺细胞的制备：颈椎脱位处死小鼠，无菌取胸腺至于平皿中，加入5 ml 10%FCS-IMDM培养液，200目不锈钢网制成单个细胞悬液；1500 r/min 离心10分钟，再用5%Hank’s液洗涤细胞2次后，重悬于10%FCS-IMDM培养液中，调细胞浓度为1.0×10⁷/ml。

 

（2）加样：取胸腺细胞加入96孔细胞培养板，0.1 ml/well。再加入IL-1待测样品或IL-1标准品，50 ul/well，实验孔再加入50 ul ConA（终浓度0.625 ug/ml），同时设培养液对照孔（0.1 m l细胞+0.1 ml 培养液）、ConA对照（0.1 ml 细胞+50 ul 培养液+50 ul ConA），均设3复孔。37度，5%CO₂孵育36~60小时。

 

（3）³H掺入：每孔加1.85×10¹⁰ uBq/20 ul（0.5 uCi/20 ul）³H-TdR，继续培养8小时。

 

（4）测定：多孔细胞收集器收集细胞于玻璃纤维滤纸上，用β液体闪烁仪测定³H-TdR

 

（5）掺入量（cpm）以净cpm值（实验孔-ConA对照孔cpm值）为纵坐标，对应的不同稀释浓度IL-1标准品为横坐标，在半对数图纸上绘制出标准曲线，再从标准曲线上查出待测样品中的IL-1含量。

1.  吸取LPS刺激的小鼠巨噬细胞培养上清时，必须离心，以除去细胞及细胞破碎成分。

2.  ConA应选择淋巴细胞转化实验的亚剂量，即选择能够激活胸腺细胞，又不引起明显增殖的量，如果ConA过量，则不能有效反应IL-1的刺激活性。