1.  淋巴细胞提取

（1）取豚鼠抗凝血2毫升，加3毫升Hanks液使之稀释。加于3毫升淋巴细胞分层液液面之上（沿管壁轻轻加入，勿使两液相混）。

（2）2000转/分离心30分钟，吸淋巴细胞层到另一试管中加5倍体积的Hanks液洗1~2次，（1500转/分离心10分钟）弃上清即成。

图1  用分层液离心后的血细胞层

2.  加吸收过的胎牛血清0.1毫升，0.5%兔红细胞悬液0.2毫升，于淋巴细胞中。混合后，37℃水浴5分钟。

3.  500转/分离心5分钟，放4℃冰箱中2小时后，弃大部分上清。

4.  染色及观察

轻轻悬浮沉积的细胞。向悬液中滴一滴美兰液，混合，10分钟后取一滴放载玻片上，加盖玻片镜检。

高倍镜或油镜下计数200个淋巴细胞，凡结合3个或3个以上的兔红细胞者为阳性，计算花环形成细胞的百分率。