实验方法

补体结合反应实验

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当抗原与其对应的抗体结合时,所生成的抗原抗体复合物能从溶液中将补体吸着此即谓补体结合。参与补体结合反应的抗原是透明的溶液,故补体结合现象不能被肉眼看出来,因此必须借助溶血系统作为指示剂,来判定媒质中有无游离的补体。

补体结合反应

实验原理

一、预备试验

预备试验包括溶血素效价的滴定,补体效价的滴定,抗原效价的滴定及被检血清的处理。

1.  溶血素效价的滴定:按照下表加入各物
凡最高稀释度的溶血素可呈现完全溶血者为一个单位。依上表结果第10管(即1:4000倍稀释)0.5毫升溶血素为一个单位,在溶血反应中常用0.5毫升中含有2个溶血素单位的溶液,所以试验时应取1:2000倍稀释的溶液。

2.  补体单位滴定:依下表加入各试剂
能引起完全溶血的最小补体量称为准确单位,上表中第3管(即0.3毫升),但因补体的效价可能有部分损失,故普通稍高的一管为实用单位,实际试验时须用两个实用单位。
上表的结果为:
补体标准单位:0.3毫升
补体实用单位:0.35毫升
补体两个实用单位:0.70毫升
因试验时是两个实用单位的补体0.5毫升,可依下列比例关系换算:
20:0.7=ⅹ:0.5
ⅹ= 14.3
即须将补体稀释14.3倍,用0.5毫升则含有两个实用单位。

3.  抗原的滴定
在用已知抗原测定未知抗体时,必须先滴定抗原效价以决定本试验时所需抗原的最适浓度(反之用已知抗体测定未知抗原时,则需滴定抗体效价) 
如血清对照管呈完全或部分不溶血是为抗补体现象。血清严重污染细菌,混有淋巴液或显著溶血时,常产生很强抗外体作用。又如试管、吸管不清洁,也可出现抗补体。若有抗补体发生,应抽血重试验。

实验材料

伤寒的抽出液

仪器/耗材

小试管 试管架 水浴锅

实验步骤

一、预备试验

预备试验包括溶血素效价的滴定,补体效价的滴定,抗原效价的滴定及被检血清的处理。

1.  溶血素效价的滴定:按照下表加入各物
凡最高稀释度的溶血素可呈现完全溶血者为一个单位。依上表结果第10管(即1:4000倍稀释)0.5毫升溶血素为一个单位,在溶血反应中常用0.5毫升中含有2个溶血素单位的溶液,所以试验时应取1:2000倍稀释的溶液。

2.  补体单位滴定:依下表加入各试剂
能引起完全溶血的最小补体量称为准确单位,上表中第3管(即0.3毫升),但因补体的效价可能有部分损失,故普通稍高的一管为实用单位,实际试验时须用两个实用单位。
上表的结果为:
补体标准单位:0.3毫升
补体实用单位:0.35毫升
补体两个实用单位:0.70毫升
因试验时是两个实用单位的补体0.5毫升,可依下列比例关系换算:
20:0.7=ⅹ:0.5
ⅹ= 14.3
即须将补体稀释14.3倍,用0.5毫升则含有两个实用单位。

3.  抗原的滴定
在用已知抗原测定未知抗体时,必须先滴定抗原效价以决定本试验时所需抗原的最适浓度(反之用已知抗体测定未知抗原时,则需滴定抗体效价) 
如血清对照管呈完全或部分不溶血是为抗补体现象。血清严重污染细菌,混有淋巴液或显著溶血时,常产生很强抗外体作用。又如试管、吸管不清洁,也可出现抗补体。若有抗补体发生,应抽血重试验。

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