实验方法

实验室最危险的十七种化学物质和防护注意事项

2013-02-26 00:00

1. DMSO

DMSO是二甲基亚砜,用途广泛。用作乙炔、芳烃、二氧化硫及其他气体的溶剂以及腈纶纤维纺丝溶剂。是一种即溶于水又溶于有机溶剂的极为重要的非质子极性溶剂。对皮肤有极强的渗透性,有助于药物向人体渗透。也可作为农药的添加剂。也是一种十分重要的化学试剂。

DMSO也是一种渗透性保护剂,能够降低细胞冰点,减少冰晶的形成,减轻自由基对细胞损害,改变生物膜对电解质、药物、毒物和代谢产物的通透性。 但是研究表明,DMSO存在严重的毒性作用,与蛋白质疏水基团发生作用,导致蛋白质变性,具有血管毒性和肝肾毒性。

DMSO是毒性比较强的东西,用的时候要避免其挥发,要准备1%-5%的氨水备用,皮肤沾上之后要用大量的水以及稀氨水洗涤。

最为常见的为恶心、呕吐、皮疹及在皮肤和呼出的气体中发出大蒜、洋葱、牡蛎味。

吸入:高挥发浓度可能导致头痛,晕眩和镇静。

皮肤:能够灼伤皮肤并使皮肤有刺痛感,如同所见的皮疹及水泡一样。若二甲基亚砜与含水的皮肤接触会产生热反应。要避免接触含有毒性原料或物质的二甲基亚砜溶液,因其毒性不为人所知,而二甲基亚砜却可能会渗入肌肤,在一定条件下会将有毒物质代入肌肤。

吸收:吸收危险性很低。

2. EB(Ethidium bromide,溴化乙锭)

溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂,用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA。溴化乙锭用标准302 nm 紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号,观察琼脂糖凝胶中DNA最常用的方法是利用荧光染料溴化乙锭进行染色,溴化乙锭含有一个可以嵌入DNA堆积碱基之间的一个三环平面基团。它与DNA的结合几乎没有碱基序列特异性。

在高离子强度的饱和溶液中,大约每2.5个碱基插入一个溴化乙锭分子。当染料分子插入后,其平面基团与螺旋的轴线垂直并通过范德华力与上下碱基相互作用。这个基团的固定位置及其与碱基的密切接近,导致与DNA结合的染料呈现荧光,其荧光产率比游离溶液中染料有所增加。DNA吸收254 nm 处的紫外辐射并传递给染料,而被结合的染料本身吸收302 nm 和366 nm 的光辐射。这两种情况下,被吸收的能量在可见光谱红橙区的590 nm 处重新发射出来。

由于溴化乙锭-DNA复合物的荧光产率比没有结合DNA的染料高出20-30倍,所以当凝胶中含有游离的溴化乙锭(0.5 μg/ml)时,可以检测到少至10 ng 的NDA条带。溴化乙锭可以嵌入碱基分子中,导致错配。溴化乙锭是强诱变剂,具有高致癌性!会在60-70度时蒸发(所以最好不要在胶太热的时候加,或者应该加到液体里,0.5 μg/ml,染色半小时)(当EB加得过多时,也可以在室温用水将已染色的凝胶浸泡20 min 以降低未结合的EB引起的背景荧光)。

溴化乙锭溶液的净化处理:由于溴化乙锭具有一定的毒性,实验结束后,应对含EB的溶液进行净化处理再行弃置,以避免污染环境和危害人体健康。

(1) 对于EB含量大于0.5 mg/ml 的溶液,可如下处理:

①将EB溶液用水稀释至浓度低于0.5 mg/ml;

②加入一倍体积的0.5 mol/L KMnO4,混匀,再加入等量的25 mol/L HCl,混匀,置室温数小时;

③加入一倍体积的2.5 mol/L NaOH,混匀并废弃。

(2)EB含量小于0.5 mg/ml 的溶液可如下处理:

① 按1 mg/ml 的量加入活性炭,不时轻摇混匀,室温放置1小时;

② 用滤纸过滤并将活性碳与滤纸密封后丢弃。

3. DEPC

DEPC即二乙基焦碳酸酯(diethylprocarbonate),可灭活各种蛋白质,是RNA酶的强抑制剂。DEPC是一种潜在的致癌物质,在操作中应尽量在通风的条件下进行,并避免接触皮肤。DEPC毒性并不是很强,但吸入的毒性是最强的,使用时戴口罩。不小心占到手上注意立即冲洗,RNase AwayTM试剂可以替代DEPC,操作简单,价格低,且无毒性。只需将RNase AwayTM直接倒在玻璃器皿和塑料器皿的表面,浸泡后用水冲洗去除,即可以快速去除器皿表面的RNase,并且不会残留而干扰后继实验。

注:平时使用的DEPC处理水:加0.1% DEPC到去离子水中,混匀过夜,然后高温高压121℃, 20 min, DEPC即降解成二氧化碳和水无毒。同样,DEPC处理的枪头等也是无毒的,但是要注意再次感染RNase。

4. 丙烯酰胺

属中等毒性物质。可通过皮肤吸收及呼吸道进入人体,因此,在搬运和使用中必须穿戴好防护用具,如防毒服,防毒口罩及防毒手套等。丙烯酰胺的危害主要是引起神经毒性,同时还有生殖、发育毒性。神经毒性作用表现为周围神经退行性变化和脑中涉及学习、记忆和其他认知功能部位的退行性变化,试验还显示丙烯酰胺是一种可能致癌物,职业接触人群的流行病学观察表明,长期低剂量接触丙烯酰胺会出现嗜睡、情绪和记忆改变、幻觉和震颤等症状,伴随末梢神经病如手套样感觉、出汗和肌肉无力。 累积毒性,不容易排毒。

具备以下任何一项者,可列为慢性丙烯酰胺中毒观察对象:

(1)接触丙烯酰胺的局部皮肤出现多汗、湿冷、脱皮、红斑;

(2)出现肢端麻木、刺痛、下肢乏力、嗜睡等症状;

(3)神经-肌电图显示有可疑神经源性损害。

治疗原则:

可用B族维生素、能量合剂,并辅以体疗、理疗及对症治疗。重度中毒者应同时加强支持疗法。

5. N,N‘-亚甲双丙烯酰胺(甲叉双丙烯酰胺)

可用作制备聚丙烯酰胺凝胶的交联剂,生物高分子化合物(蛋白质、多肽、核酸)的分离 具有取代基丙烯酰胺,因此具有一定的毒性。能轻微刺激眼睛、皮肤和粘膜。应避免与人体长时间直接接触。误触应用清水洗净。

有毒,毒性小,影响中枢神经系统,切勿吸入粉末。

6. DTT 二硫苏糖醇

DTT的用途之一是作为巯基化DNA的还原剂和去保护剂。巯基化DNA末端硫原子在溶液中趋向于形成二聚体,特别是在存在氧气的情况下。这种二聚化大大降低了一些偶联反应实验(如DNA在生物感应器中的固定)的效率;而在DNA溶液中加入DTT,反应一段时间后除去,就可以降低DNA的二聚化。

DTT也常常被用于蛋白质中二硫键的还原,可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。但DTT往往无法还原包埋于蛋白质结构内部(溶剂不可及)的二硫键,这类二硫键的还原常常需要先将蛋白质变性(高温加热或加入变性剂,如6 M 盐酸胍、8 M 尿素或1% SDS)。反之,根据DTT存在情况下,二硫键还原速度的不同,可以判断其包埋程度的深浅。

很强的还原剂,散发难闻的气味。可因吸入、咽下或皮肤吸收而危害健康。当使用固体或高浓度储存液时,戴手套和护目镜,在通风橱中操作。

7. TEMED(N,N,N',N'-四甲基乙二胺)

用于配制PAGE胶等。TEMED可以催化过硫酸铵产生自由基,从而加速丙烯酰胺凝胶的聚合。

强神经毒性,防止误吸,操作时快速,存放时密封。

8. PMSF

抑制丝氨酸蛋白酶(如胰蛋白酶,胰凝乳蛋白酶,凝血酶)和巯基蛋白酶(如木瓜蛋白酶)。

在水液体溶液中不稳定,30分钟就会降解一半,必须在每一分离和纯化步骤中加入新鲜的PMSF,样品处理超过1 h,补加一次。

苯甲基磺酰氟[(PMSF),C7H7FO2S或C6H5CH2SO2F] 是一种高强度毒性的胆碱酯酶抑制剂。它对呼吸道黏膜、眼睛和皮肤有非常大的破坏性。可因吸入、咽下或皮肤吸收而致命。戴合适的手套和安全眼镜,始终在化学通风橱里使用。在接触到的情况下,要立即用大量的水冲洗眼睛或皮肤,已污染的工作服丢弃掉。

9. 氯仿(CHCl3)

麻醉剂;脂肪、橡胶、树脂、油类、蜡、磷、碘和粘合压克力的溶剂;青霉素、精油、生物碱等的萃取剂;测定血清中无机磷;清洗剂;肝功能试验的防腐剂等。

对皮肤、眼睛、黏膜和呼吸道有刺激作用。它是一种致癌剂,可损害肝和肾。它也易挥发,避免吸入挥发的气体。操作时戴合适的手套和安全眼镜并始终在化学通风橱里进行。

同时,由于氯仿的沸点较低,在气温较高的环境开盖时应注意不要朝向有人方向,以免瓶盖射出伤人。

10.  甲醛(HCOH) 
甲醛有效固定作用的要点是,在蛋白质末端基团之间形成交联链。参与甲醛固定蛋白质的基团,主要为氨基,亚氨基及酰氨基,肽,胍基,羟基,SH和芳香环。甲醛与组织蛋白类的反应是多样和复杂的,因为它能和多种不同的功能基团结合,在多数情况下在其间形成桥键。

甲醛有这种交联的功能,也是它的缺点,在用甲醛固定过的组织中,需要做免疫组化的,往往提倡用酶消化或热抗原修复法来使蛋白与甲醛交联的醛键断裂开,以利于后来的染色。甲醛可配成简单的或混合的固定液,最简单和最容易掌握的方法,就是取10 ml 甲醛液,加水90 ml,这就是10%的福尔马林.当然,现在使用的固定液要求较为严格些,最好是使用缓冲福尔马林固定液,这将有利于后来的免疫组化染色的需要。 

有很大的毒性并易挥发,也是一种致癌剂。很容易通过皮肤吸收,对眼睛、黏膜和上呼吸道有刺激和损伤作用。避免吸入其挥发的汽雾。要戴合适的手套和安全眼镜。始终在化学通风橱内进行操作。远离热、火花及明火。 
 
11.  吉姆萨(Giemsa)染料 
可用于制作血液涂片检查寄生性原生动物,如疟原虫、锥虫(trypanosomes);对致病性螺旋体(如Leptospira,Borrelia等)、病毒、立克次氏体、过氧化酶、染色体(染色体带型分析)等染色;也可应用于组织培养研究和试剂。 

吉姆萨(Giemsa)染色法 :吉姆萨染液由天青,伊红组成。嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结果,染粉红色,称为嗜酸性物质;细胞核蛋白和淋巴细胞 胞浆为酸性,与碱性染料美蓝或天青结合,染紫蓝色,称为嗜碱性物质;中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合,染淡紫色,称为中性物质。 

咽下可致命或引起眼睛失明,通过吸入和皮肤吸收是有毒的。其可能的危险是不可逆的效应。戴合适的手套和安全护目镜。在化学通风橱里操作,不要吸入其粉末。 
 
12.  叠氮钠(NaN3) 
在生化研究中,叠氮化钠属于诱变剂,与其化学性质有关的解释是因为叠氮酸根离子可以与某些酶作用,主要是因为它有一定的配位性,可以替代某些正常的配体,而使某些生物蛋白质发生突变。 

毒性非常大。它阻断细胞色素电子运送系统。含有叠氮钠的溶液要标记清楚。可因吸入、咽下或皮肤吸收而损害健康。戴合适的手套和安全护目镜,操作时要格外小心。 

皮肤接触:脱去被污染的衣着,用肥皂水和清水彻底冲洗皮肤。

眼睛接触:提起眼睑,用流动清水或生理盐水冲洗,就医。

吸入:迅速脱离现场至空气新鲜处,保持呼吸道通畅。如呼吸困难,给输氧;如呼吸停止,立即进行人工呼吸。就医。

食入:饮足量温水,催吐,就医。

灭火方法:消防人员必须穿戴全身防火防毒服。由于火场中可能发生爆破的情况,消防人员须在有防爆能力的掩蔽处操作。

灭火剂:雾状水、二氧化碳、泡沫。禁止用砂土压盖。 
 
13.  十二烷基硫酸钠(SDS) 
SDS是一种已知的能够使蛋白质变性的去污剂。它用于确定蛋白分子量的聚丙烯酰胺凝胶电泳。它也可以用于核酸抽提操作中破坏细胞壁及裂解核酸:蛋白复合物。在乳液聚合反应中,可充当两相溶液的乳化剂。 

有毒,是一种刺激物,并造成对眼睛的严重损伤的危险。可因吸入、咽下或皮肤吸收而损害健康。戴合适的手套和安全护目镜。不要吸入其粉末。 

皮肤接触: 脱去污染的衣着,用大量流动清水冲洗。

眼睛接触: 提起眼睑,用流动清水或生理盐水冲洗。就医。

吸入: 脱离现场至空气新鲜处。如呼吸困难,给输氧。就医。

食入: 饮足量温水,催吐。就医。

灭火方法: 消防人员须佩戴防毒面具、穿全身消防服,在上风向灭火。

灭火剂:雾状水、泡沫、干粉、二氧化碳、砂土。 
 
14.  三氯乙酸(TCA) 
TCA与蛋白质之间主要有以下几个方面的作用:
①在酸性条件下与蛋白质形成不溶性盐。
②作为蛋白质变性剂使蛋白质构象发生改变,暴露出较多的疏水性基团,使之聚集沉淀。
③随着蛋白质分子量的增大,其结构复杂性与致密性越大,TCA可能渗入分子内部而使之较难被完全除去,在电泳前样品加热处理时可能使蛋白质结构发生酸水解而形成碎片,而且随时间的延长这一作用愈加明显;在电泳时使用TCA对蛋白质样品的浓缩或除盐时,对于分子质量大的蛋白质,要慎重选择TCA。

对小分子量蛋白质的浓缩,采用TCA时也有两点需要注意:一是用TCA沉淀后,尽量用丙酮彻底抽提TCA;二是样品处理后要尽快进行电泳分析,以免发生聚集及断裂,造成结果分析的不准确。 

吸入本品粉尘对呼吸道有刺激作用,可引起咳嗽、胸痛和中枢神经系统抑制。眼直接接触可造成严重损害,重者可导致失明。皮肤接触可致化学性灼伤。口服灼伤口腔和消化道,出现剧烈腹痛、呕吐和虚脱。 
有很强的腐蚀性。戴合适的手套和安全防目镜。 
 
15.  Triton X-100(聚乙二醇辛基苯基醚)
能溶解脂质,以增加抗体对细胞膜的通透性。免疫细胞化学中Triton X-100常用浓度为1%和0.3%,其中1%的Triton X-100常用于漂洗组织标本,0.3%的Triton X-100则常用于稀释血清,配制BSA等。但通常是先配制成30%的Triton X-100储备液,临用时稀释至所需浓度。 

在生命科学领域,该产品经常被用于水中帮助分解蛋白酶;但是,必须使用尽可能低的浓度否则会污染样品,污染还会影响MS分析。基因工程中还用作限制性内切酶的缓冲液(NEBuffer EcoRI)的成分之一。 

能够引起严重的眼睛刺激和灼伤。可因吸入、咽下或皮肤吸收而受害。戴合适的手套和护目镜。 
 
16.  过硫酸铵[(NH42S2O8
对黏膜和上呼吸道组织、眼睛和皮肤有极大危害性。吸入可致命。操作时戴合适的手套、安全眼镜和防护服。始终在通风橱里操作,操作完后彻底洗手。 

皮肤接触: 立即脱去污染的衣着,用大量流动清水冲洗至少15分钟。就医。

眼睛接触: 立即提起眼睑,用大量流动清水或生理盐水彻底冲洗至少15分钟。就医。

吸入: 迅速脱离现场至空气新鲜处,保持呼吸道通畅。如呼吸困难,给输氧。如呼吸停止,立即进行人工呼吸。就医。

食入: 用水漱口,给饮牛奶或蛋清。就医。

灭火方法: 采用雾状水、泡沫、砂土灭火。 
 
17.  Trizol 
TRIzol是一种新型总RNA抽提试剂,可以直接从细胞或组织中提取总RNA。其含有苯酚、异硫氰酸胍等物质,能迅速破碎细胞并抑制细胞释放出的核酸酶。TRIzol在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性,因此对纯化DNA及标准化RNA的生产十分有用。 

含有毒物质苯酚,如皮肤接触Trizol,请立即用大量去垢剂和水冲洗,如仍有不适,请听取医生意见。如果只是少量接触,并且处理后症状减轻,估计问题就不大了。 

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来源:互联网

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