实验方法

葡萄糖来源AGEs ELISA检测试剂盒

2013-09-10 11:31

葡萄糖来源 AGEs ELISA 检测试剂盒

（ Glucose-derived AGEs ELISA Kit ）

研究背景

越来越多的证据指出晚期糖基化终端产物（ AGEs ）修饰蛋白严重影响到老龄化人群的健康问题。 AGEs 是葡萄糖与自由的蛋白质氨基基团发生非酶促糖基化反应的终端不可逆代谢产物的总称。

其在人体内的积累会引发组织或器官一系列的病理性变化，从而导致白内障、阿尔茨海默氏病、骨关节炎、心功能不全等疾病发生。糖尿病（高血糖）病发也与 AGE 在体内积累速度加快有关。

研究发现 AGEs 的生成来源主要是葡萄糖，还有二羰基化合物、短链还原糖和葡萄糖的其他代谢途径。

目前确定结构属于 AGE 的单体化合物有 CML 、 CEL 、 Pentosidine, Pyrraline, Imidazolone, Crosslin 等，针对这些化合物和 AGEs 、 AGE1 ～ 4 生产的抗体大量应用于生命科学和医学领域，发表的相关论文一一都证实了 AGEs 是老化、与老化相关的慢性疾病发生的重要影响因素。

检测原理

葡萄糖来源的 AGEs （ Glc-AGEs ） ELISA 试剂盒利用的是基于 “ 三明治 ” 原理的固相酶联免疫吸附试验（ ELISA ）。 96 孔板的表面有一层单克隆抗体涂层可直接识别样品中 Glc-AGEs 的特异性抗原位点，然后使用 HRP 标记的 anti-AGE 抗体结合 Glc-AGEs 形成 “ 三明治 ” 复合物，最后酶显色对样品进行定性和定量研究。

检测对象

人或其他动物的纯化蛋白、血浆、血清和细胞裂解液。

试剂盒成分

(1) Antibody coated microtiter plate, 96 wells, 1 plate

(2) Glucose-derived AGEs standard , 250 uL×2

(3) Reference standard and sample diluent, 15 mL×1

(4) HRP- anti AGEs antibody concentrate(×100), 60 uL×1 (mouse monoclonal antibody)

(5) OPD (o-phenylendiamine) tablets, 2 tab.

(6) Substrate solution, 30 mL×1

(7) Stop solution, 15 mL×1

(8) Wash buffer concentrate (× 20) , 30 mL×1

(9) Dilution plate, 1 plate

实验准备

工作液配制	清洗液	使用前确保 wash buffer 浓缩液内无结晶颗粒，往 30 ml 的浓缩液内加入 570 ml 去离子水即为工作液，此溶液可以保存在 2-8℃最多放 14 天。
	抗体稀释液	用 10 倍体积的清洗液稀释 "Reference standard and sample diluent" 即可。
	标准溶液	用等体积 "Reference standard and sample diluent" 稀释 "Glucose-derived AGEs standard" （ 500ng/ml ），如下图所示，依次配成 250, 125, 62.5, 31.25, 15.63, and 7.82 ng/ml 的溶液。
	HRP 标记 -AGEs 抗体（ 100× ）	用 5 ml 的抗体稀释溶液稀释 50ul 的 HRP-anti AGEs antibody 浓缩液，稀释后的抗体不能保存。
	显色液	在使用前加 1 片 OPD tablet 到 13 ml 底物溶液即可，此溶液需现配现用。
待测样品的准备		用 "Reference standard and sample diluent" 稀释样品，若样品浓度非常高，需用 PBS 进行预稀释，最后再调整浓度至 100× 或更高。

实验准备

1	96 孔板准备	加入 300 ul 的清洗液至每个孔内，温育 30 min ；完全倒掉孔内溶液后，再加入 300ul 清洗液。再重复此步 2 次。
2	一抗反应	按 50 ul/ 孔的量加入标准溶液、稀释样品孵育 1 hour ，可以做两个平行。孵育完成后吸去反应液，用 300 ul 清洗液清洗 3 次。
3	二抗反应	加 50 ul/ 孔的 100 倍稀释的 HRP- anti AGEs antibody ，孵育 1 hour 。孵育完成后吸去反应液，用 300 ul 清洗液清洗 3 次。
4	显色	加 100 ul/ 孔显色液，孵育 10 min ；
5	终止反应	加 100ul/ 孔终止液终止酶显色反应；
6	读取吸光度	酶标仪在 490 nm 下读取吸光值；
7	计算结果	使用标准曲线计算出 AGEs 的浓度，使用 4- Parameter Logistic Model 分析数据。

订购信息：所有试剂-30 ℃保存，仅作科研研究。

产品名称	货号	特异性	规格	应用	价格（￥）
Glucose-derived AGEs ElISA kit	KG452	All animal species	96 tests	ELISA	8316.00

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来源：互联网

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