实验方法

小鼠肾缺血再灌注模型

2018-09-28 16:09

急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)是临床上较为常见的急危重病症之一,常见于大手术后、创(烧)伤、危重病等患者中,可导致患者电解质紊乱、酸中毒及容量负荷过重,并最终可发展成为尿毒症。

肾缺血再灌注(renal ischemiareperfusion,RIR)损伤是由各种原因导致的肾脏灌注不足所致,伴随着一系列连贯的细胞事件发生,包括活性氧 (ROS) 释放、凋亡、坏死、炎症细胞的浸润和活性介质的释放,从而导致组织损伤,常见于各种类型的休克、急性肾动脉阻断或肾脏移植等临床治疗过程,是临床上导致 AKI 的最常见原因。应用微型动脉夹夹闭双侧肾蒂方法制备小鼠 IRI 模型,是目前较为常用的研究方法。

模型制备方法:


动物麻醉后(可选择气体麻醉或腹腔麻醉),沿腹正中线做 1.5~2.0 cm 的切口,逐层分离皮肤、腹膜,进入腹腔,将肠道推向一侧,找到肾蒂后用无损伤微型动脉夹迅速阻断左右肾蒂,可见肾脏由鲜红变紫黑色,表示夹闭成功。



根据实验具体需要确定夹闭时间,雄性小鼠一般选择 30~45min,雌性小鼠缺血 75min 左右。去除动脉夹,恢复血流灌注,可见肾脏迅速由紫黑色变为鲜红色,恢复原来颜色,术毕分层缝合关闭腹腔。


术后小鼠于 24~29 ℃ 的环境保暖,补充水与饲料。术中应用生理盐水使小鼠保持充分的水化。


检测指标:

血生化检测:

肌酐 (creatinine,Cre)是肌肉在机体内代谢的产物,主要由肾小球滤过排出体外。肾损伤后血肌酐水平升高。

尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN),肾功能主要指标之一,尿素氮从肾脏肾小球过滤后排泄到尿中,如果肾脏的排泄机能变差,血液中尿素氮的浓度会增加。


病理学检测:

肾组织 HE 染色,观察肾小管坏死情况;

TUNEL 染色观察细胞凋亡情况;

根据实验目的,通过免疫组化及荧光方法检测相关蛋白;


蛋白及分子生物学检测:

PCR、Western Blot 检测相关基因及蛋白表达情况。


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来源:永欣康泰

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