实验方法

NEB的M13噬菌体随机肽库和NOVAGE的T7噬菌体肽库的优缺点?

2008-08-05 00:00

各位好!我有几个关于PHAGE DISPLAY 问题想请教下你。请问一下Ph.D随机太库和M13 cDNA肽库两者的优缺点??各在什么情况下选择较佳?还有NOVEGEN 的预制人组织的cDNA文库原理,在什么情况下使用?我打算研究与睾丸组织中相互作用的蛋白,是否用NOVEGEN的预制人睾丸cDNA文库?最后,请问这些文库的代理商?

噬菌体: M13KE T7

宿主细胞 : ER2738 BL21/BLT5403/BLT5615

噬菌体释放方式: M13噬菌体溶源性,不裂解宿主菌。极大地简化了每轮淘选过程中的噬菌体纯化步骤,只用简单的PEG沉淀方法即可。 T7是裂解性的,其展示的蛋白不需分泌。这一优点使更多的序列可能被展示。 但不利于提纯 。

融合方式:M13噬菌体N端与pIII蛋白融合,不适合克隆cDNA,因为cDNA中为oligo d(T))常位于翻译终止密码子的下游。T7噬菌体C端与T7基因10 衣壳蛋白融合,即使插入片段内含有终止密码子也可以被表达和展示。

融合序列大小:M13噬菌体展示肽库为7肽、12肽和环7肽,<30氨基酸;而T7噬菌体展示肽库为40 – 50 aa 、900aa、1200aa

价格:NEB噬菌体肽库:3969人民币; T7噬菌体展示肽库预制:11329元;

产品用途 :NEBM13噬菌体展示肽库可用于定位抗原决定簇, 确定蛋白质相互作用位点, 鉴定酶的底物或抑制物, 鉴定受体激活物或抑制剂, 研制多肽药物,开发新药, 肿瘤治疗和 疫苗制造,用途广泛。T7噬菌体肽库可用于蛋白相互作用 (例如激素,抗体,受体),酶分析, 酶抑制;核酸-蛋白相互作用,抗原决定簇作图,突变分析。

您可以根据您的实验需要,经费或其他条件选择。

另外,补充一下:

一、Ph.D随机肽库和M13 cDNA肽库的区别:

1、噬菌体展示肽库是基于完全随机的肽库序列,以New England Biolab Ph.D七肽为例,该文库是线性的随机7肽文库,含有2.8*10的9次方个克隆,即使不能完全也是绝大多数的囊括了所有可能的随机7肽序列即20的7次方。

2、cDNA表达文库则局限于天然存在的蛋白序列。

3、相较而言,噬菌体展示技术主要优点就是容易对容量较大的文库进行筛选,多样性大于10的9次方。标准的cDNA文库筛选,受噬菌斑数目或能通过杂交筛选的克隆数目的限制,通常只能达到10的4次方个数量级。

二、如何选择:

选择文库的依据在于:你的目的是要鉴定能与靶分子紧密结合的序列,无论天然还是合成的都可以;还是只是想鉴定靶分子的天然体内配体序列。所以ph.D更适合于筛选鉴定新配体或测定两个已知蛋白间的相互作用位点。而当您要鉴定某一蛋白质的天然配体时,cDNA文库或者酵母双杂交等系统可能会更适合。

从您的实验目的看,可能cDNA文库更适合。

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来源:互联网

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