实验方法

【求助】怎样判断在一个细胞中同时了导入两个含GFP标记的慢病毒过表达载体?感谢高手指点!

2015-09-01 17:48

在下欲构建两个含GFP的慢病毒过表达载体,但是有一个关键问题就是我构建的这两个目的基因是要导入同一个细胞的,我要表达的目的基因是miR-141, miR-200c. 要感染的细胞是MDA-MB-231, 这两种表达载体都是GFP标记的,我不知道在最后怎样判断两个基因都导入细胞了,后来我在想可不可以在同一个病毒上同时插入两个目的基因,比如miR-200c/miR-141(因为这两个基因在同一条染色体上,且靠的很近,中间隔了不到400个碱基),但这样我又担心导进去后基因不一定都表达,担心会不会受其他调控表达的机制的影响,比如甲基化等表观遗传学的影响。

希望哪位高手能为在下指点迷津,非常感激!
你好!你可以一个慢病毒过表达载体用GFP,另一个慢病毒过表达载体用RFP来标记,这样就可以解决你的问题。
你其实可以使用一个带GFP的,一个带PURO抗性的载体不就ok了?两个放在一起也是可以的,其实应该说是更好,因为其表达量能够得到一致性。
非常感谢你们的指点!

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