实验方法

不同需氧量微生物的培养原理及方法

2017-05-02 17:11

一、微生物分类:

  1. 专性需氧菌:必须在有氧气的条件下才能生长,包括大多数细菌、放线菌和真菌。

  2. 微需氧菌:只能在较低的氧含量下正常生长(大气中氧含量通常为 20~21%,而微需氧菌生存环境的氧含量一般为 2~10%),如发酵单胞菌属和弯曲杆菌属等。

  3. 兼性厌氧菌:在有氧或无氧条件下均能生长,分别进行有氧呼吸和无氧呼吸,但有氧的条件下生长得更好。许多肠道细菌如大肠杆菌及真菌中的酵母菌等均属此类。

  4. 耐氧厌氧菌:能在有氧气的条件下进行厌氧生长的厌氧菌,如乳酸杆菌、乳链球菌等。生长不需要氧气,但氧气对它无毒害。

  5. 专性厌氧菌:只能在无氧的条件下生长繁殖的细菌,如产气荚膜梭菌、生孢梭菌。氧气对其有毒害,会抑制其生长甚至致死。

二、氧气耐受性:

1. 氧气还原为水的过程中,会形成某些有毒的中间产物,如过氧化氢、超氧阴离子等。其反应力强、不稳定,能破坏生物膜和生物大分子,对微生物造成毒害或致死。需氧菌和耐氧菌具有降解这些产物的酶,如过氧化氢酶、过氧化物酶、超氧化物歧化酶等,所以能在有氧条件下生长。而专性厌氧菌缺乏超氧化物歧化酶,所以只能在完全厌氧环境中生长。

三、培养方法:

培养不同需氧量微生物的试管

1~5 试管内的培养基均为为巯基乙酸肉汤(巯基乙酸肉汤用于测试微生物对氧含量需求的高低,巯基乙酸酯钠与从上往下扩散的氧气结合,氧气浓度随深度的增加而降低)。

1 中培养的专性需氧菌,必须在有氧气的条件下才能生长,所以生长在氧含量最高的上层。

2 中培养的专性厌氧菌,只能在无氧的条件下生长,所以生长在氧含量最低的下层。

3 中培养的兼性厌氧菌,在有氧或无氧条件下均能生长,所以它们分布在试管培养基各处。但有氧的条件下生长得更好,所以上层菌体分布更多。

4 中培养的微需氧菌,只能在较低的氧含量下生长,所以生长在试管中上层。

5 中培养的耐氧厌氧菌,能在有氧气的条件下进行厌氧生长,所以均匀地分布在试管培养基各处。

因此,在培养不同需氧量的微生物时,要采用不同的方法:

  1. 培养专性需氧菌:需要通气或震荡,保证充足的氧气。

  2. 培养专性厌氧菌:需排除环境中的氧气,同时在培养基中添加还原剂,降低培养基中的氧化还原电位势,如使用厌氧产气包和厌氧培养袋(厌氧箱)。

  3. 培养微需氧菌:降低环境中的氧气含量至 2~10%,如使用微需氧产气包。

  4. 培养兼性厌氧或耐氧微生物:可深层静止培养。


作者:李云翔

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